Cuando se generan fragmentos de genes de PCR de alta fidelidad, diferentes CR producen diferentes longitudes. ¿Cuál es la razón?
Las enzimas de alta fidelidad comunes incluyen Pfu y Pfu Ultra, pero la mejor enzima de alta fidelidad que he usado es Phusion.
Debido a que generalmente las enzimas de alta fidelidad tienen actividad exonucleasa, aunque la fidelidad mejora, la eficiencia de amplificación se reducirá. Por lo tanto, cuando se usa Pfu, el tiempo de amplificación suele ser más largo que el de la enzima Taq y el de Pfu. Ultra es más eficiente. Pero es inevitable que la enzima Taq P tenga una banda. Si cambia a una enzima de alta fidelidad, es posible que la P directa no dé resultados o que la banda sea muy débil.
Phusion es el mejor, su fidelidad puede ser aproximadamente 50 veces mayor que la de la enzima Taq, es demasiado fuerte y básicamente no tiene p.