Investigación sobre la mejora del método de determinación del contenido de terpeno lactonas en pastillas de hojas de Ginkgo
Medicina China Volumen 42 No. 12, 2011 65438+Febrero.
Investigación sobre la mejora del método de determinación del contenido de terpeno lactonas en pastillas de hojas de Ginkgo
Huang, Li, *
Instituto de Inspección de Alimentos y Medicamentos de Zhejiang, Hangzhou 310004, Zhejiang.
Objetivo establecer un método para la determinación del contenido de terpeno lactonas en pastillas goteantes de Ginkgo biloba. El método utilizó cromatografía líquida de alta resolución-método ELSD. La fase móvil fue metanol-agua (30:70) y el caudal volumétrico fue de 0,8 ml/min. El detector ELSD y la columna de deriva son diamon sil c 18 (150 mm x 4,6 mm, 5 micras).
La temperatura del tubo es de 105 °C y el caudal volumétrico de nitrógeno es de 3,0 l/min. Resultados Los contenidos de ginkgólido A, ginkgólido B, ginkgólido C y bilobálido fueron 1 672,2 ~ 1033,2, 1 026,4 ~ 6 158,4, 527,8 ~ 3 166,8 y 2 200,8 respectivamente. Las tasas de recuperación promedio de ginkgólido A, ginkgólido B, ginkgólido C, ginkgólidos y lactonas terpénicas totales fueron 100,3 % (RSD 2,5 %), 108,1 % (RSD 3,5 %) y 116,0 % (RSD 4,5 %) respectivamente. Conclusión Este método es simple, controlable y reproducible, y puede usarse para la determinación cuantitativa de lactonas terpénicas en pastillas de Ginkgo biloba. Proporciona una idea y una solución efectivas para la determinación simultánea de componentes de índices múltiples en medicamentos patentados chinos.
Palabras clave: Pastillas para dejar caer hojas de ginkgo; lactonas terpénicas; extracto de hoja de ginkgo; ginkgolida b; ginkgolida c; número de clasificación china: R286.02 Código de identificación de la literatura: A 2011)12-2456-03.
Mejora del método de determinación del contenido de terpeno lactona en pastillas de hojas de Ginkgo
Wei, Li Yinghong,
Instituto de Inspección de Alimentos y Medicamentos de Zhejiang, Hangzhou 310004
Palabras clave: pastillas para eliminar hojas de ginkgo; lactonas terpénicas; extracto de hojas de ginkgo; ginkgolida B; píldoras para eliminar hojas de ginkgo; , que tiene el efecto de promover la circulación sanguínea, eliminar la estasis sanguínea y desbloquear las colaterales. Puede usarse para entumecimiento del pecho, dolor de corazón, accidente cerebrovascular, hemiplejía, lengua fuerte, angina de pecho estable debido a enfermedad coronaria e infarto cerebral causado por sangre. estasis [1]. Actualmente, las pastillas para soltar Ginkgo Ye son producidas exclusivamente por Zhejiang Wanbang Pharmaceutical Co., Ltd., y los estándares figuran en la "Farmacopea China" (edición de 2010). La lactona terpénica es uno de los ingredientes activos del extracto de hoja de Ginkgo [3]. Las ginkgólidas pueden antagonizar de forma muy selectiva la agregación plaquetaria inducida por PAF, entre las cuales la ginkgólida B tiene el efecto más fuerte, reduciendo así la viscosidad de la sangre y previniendo la isquemia y la hipoxia en tejidos y órganos [4]. La determinación de ginkgólidos suele utilizar el método HPLC-ELSD, utilizando ginkgólido A, ginkgólido B, ginkgólido C y ginkgólido como controles [2,5-7], y contando la cantidad total de estos cuatro controles. Para simplificar la operación y ahorrar recursos, este experimento utilizó extracto de hoja de Ginkgo como control para la investigación metodológica y optimizó el estándar original. 1Instrumentos y materiales
Cromatógrafo líquido de alto rendimiento Agilent serie 1200 (Agilent, EE. UU.): incluye bomba cuaternaria G1311A y desgasificador G1322A.
Fecha de recepción: 2011-07-12
Proyecto del fondo: Plan Nacional de Apoyo a la Ciencia y la Tecnología “Undécimo Plan Quinquenal” (2009ZX09308-004)
Acerca del autor: Huang (1983-), mujer, de Wenzhou, Zhejiang, maestría, dedicada principalmente al análisis de la calidad de los medicamentos.
Teléfono: [1************] Fax: (0571) 86459425 Correo electrónico: Wei Qing-h@163.com
*Corresponsal Zheng Número de teléfono de Cheng: (0571) 86459414 Correo electrónico: Joe FF30 @ 163.com.
Máquina, muestreador automático G1329A, horno de columna G1316A, detector de dispersión de luz evaporativa Alltech 2000ES.
Ginkgólida (BB, número de lote 110965-200404), ginkgólida A (GA, número de lote 110862-200608), ginkgólida B (GB, número de lote 110868).
El extracto de control de hoja de ginkgo (número de lote 091004) fue proporcionado por Zhejiang Conba Pharmaceutical Co., Ltd. (estandarizado, que contiene GA 26,78 mg/g, GB 16,44 mg/g, GC 8,45 mg/g, BB 35,25 mg/g). El acetato de etilo, el acetato de sodio y el ácido clorhídrico son de calidad analítica; el metanol es de calidad cromatográfica y el agua es agua bidestilada. Pastillas que caen de hojas de ginkgo (números de lote 100310, 100311, 100312, 100209, 1004065438+) métodos y resultados 2.1 Condiciones cromatográficas
La columna cromatográfica es una columna Diamonsil C18 (150 mm×4,6 mm, 5 micrones), y la fase móvil es Metanol-agua (30:70), flujo volumétrico.
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0,8 ml/min, detector ELSD, temperatura del tubo de deriva 65438±005 ℃, flujo volumétrico de nitrógeno 3,0 L/min. Calcule el número de platos teóricos en función del pico BB.
1
1
No menos de 2500; la separación del pico GA y el pico GB es superior a 1,5. El cromatograma se muestra en la Figura 1.
Uno B
1
Tres
2
Cuatro
Tres
2
Cuatro
C
Tres
2
Cuatro
t/min
1-BB 2-GC 3-GA 4-GB
0 10 20 30 0 10 20 30 0 10 20 30
Figura 1 Cromatogramas de HPLC del control de extracto de hoja de Ginkgo (a), pastillas que caen de hojas de Ginkgo (b) y sustancia de referencia mixta (c) Figura 1 HPLC de control de extracto de hoja de Ginkgo (a), pastillas que caen de hojas de Ginkgo (b) Cromatograma,
y material de referencia mixto (C)
2.2 Preparación de la solución de referencia mixta
527,8 ~ 3 166,8, 2 200,8 ~ 13 204,8 ng estaban en buenas condiciones logarítmicas relación lineal. 2.6 Prueba de precisión
Extraiga con precisión 10 μL de la solución de extracción de control anterior, repita la inyección 5 veces y registre el área del pico. Las RSD de las áreas de los picos GA, GB, GC y BB fueron del 0,2%, 0,4%, 0,5% y 0,1% respectivamente, lo que indica una buena precisión del instrumento. 2.7 Prueba de estabilidad
Tomar la muestra con número de lote 100310 para preparar la solución de prueba, inyectarla en el cromatógrafo a las 0, 4, 10, 16, 24 y 30 h respectivamente, y registrar los valores de Área de pico GA, GB, GC y BB. Los resultados muestran que las desviaciones estándar relativas de las áreas de los picos de GA, GB, GC y BB son del 0,5% respectivamente. 2.8 Prueba de reproducibilidad
Tome aproximadamente 0,5 g de la muestra con el número de lote 100310, opere según el método de preparación de la solución de prueba, inyéctela en el cromatógrafo líquido y mida según la ley. La desviación estándar relativa de las lactonas terpénicas totales es del 2,3 %, y las desviaciones estándar relativas de GA, GB, GC y BB son del 2,4 %, 3,0 %, 2,8 % y 65438+ respectivamente. 2.9 Prueba de recuperación de muestras
Según el método de preparación de la solución de prueba, tomar 6 muestras del mismo lote (número de lote 100310), agregar 0,1,25 g de extracto estandarizado de hoja de ginkgo e inyectar en el cromatógrafo líquido. y medir de acuerdo con la ley, calcular la tasa de recuperación y RSD. Los resultados mostraron que las recuperaciones promedio de GA, GB, GC, BB y lactonas terpénicas fueron 100,3%, 108,1%, 116,0%, 90,4% y 99,3% respectivamente, y las desviaciones estándar relativas fueron 2,5% y 99,3% respectivamente. 2.10 Medición de muestras
Tome 6 lotes de muestras, cada lote pesa aproximadamente 0,5 g, opere de acuerdo con el método de preparación de la solución de prueba, inyéctela en el cromatógrafo líquido y mida de acuerdo con la ley. Consulte la medicina china.
Pesar con precisión 22,47 mg, 18,97 mg, 10,25 mg y 19,60 mg de GA, GB, GC y BB respectivamente, colocarlos en un matraz aforado de 20 mL, agregar metanol para disolver y diluir hasta la marca. y agitar bien. Se obtiene la solución de control mixta.
2.3 Preparación de la solución de prueba
Tomar 20 hojas de ginkgo, triturarlas finamente, mezclar bien, tomar 0,5 g, pesarlo con precisión, colocarlo en un matraz Erlenmeyer con tapa, agregar 20 mL de agua, 4 gotas de 2%. Solución de ácido clorhídrico y 20 ml de acetato de etilo, calentar a reflujo durante 30 min; enfriar a temperatura ambiente, transferir a un embudo de decantación, separar la solución de acetato de etilo, extraer la solución acuosa con acetato de etilo tres veces, 20 ml cada vez, combinar las soluciones de acetato de etilo y utilizar Extraer 20 ml de solución de acetato de sodio al 5%, separar la solución de acetato de sodio, extraer 20 ml con acetato de etilo, combinar las soluciones de acetato de etilo, lavar dos veces con agua, 10 ml cada vez, separar la solución acuosa , extraer 20 ml con acetato de etilo y combinar.
2.4 Preparación de la solución del extracto de control
Tomar 0,15 g de extracto de control de hoja de ginkgo estandarizado, pesarlo con precisión y preparar la solución del extracto de control según el método de preparación de la solución de prueba.
2.5 Investigación de relaciones lineales
Extraiga con precisión 2, 4, 6, 8, 10 y 12 μL de la solución de extracción de control anterior e inyéctelos en el cromatógrafo líquido de alto rendimiento. respectivamente, el valor logarítmico es la abscisa (X) y el valor logarítmico del área del pico es la ordenada (Y). Se realiza una regresión lineal para obtener la ecuación de regresión: Gay = 1,249X-2. GB Y = 1,421,6 X-4,629 1, r = 0,999 4; GC Y = 1,646 2 ,
BB oscila entre 1 672,2 y 1033,2, 1 026,4 y 6 158,4,
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[1]La cantidad de lactona terpénica canónica se basa en la cantidad total de GA, GB, GC y BB.
Se estudió la temperatura del tubo de deriva y el caudal volumétrico de nitrógeno. Los resultados muestran que el valor de respuesta es máximo cuando la temperatura del tubo de deriva es de 105 °C y el caudal volumétrico de nitrógeno es de 3,0 L/min.
Al mismo tiempo, se determinó el contenido total de terpenolactona en seis lotes de muestras utilizando el método de referencia mixto convencional. En comparación, las desviaciones medias relativas de los dos métodos son 0,9%, 0,8%, 0,4%, 65438±0,3%, 0,0% y 65438±0,2% respectivamente.
Para hacer el estándar más científico y sencillo, los resultados de las terpenolactonas se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1 Resultados de la determinación cuantitativa de lactonas terpénicas totales en pastillas de excremento de hojas de Ginkgo (n = 2)
Tabla 1 Determinación de lactonas terpénicas
Goteo de Ginkgo biloba Ye pastillas (n = 2)
Número de lote
Lactonas terpénicas totales/(mg de pastilla? 1)
Método de extracción del control de la hoja de ginkgo
Método de referencia mixto
100310 1,11 1,09 100311 1,17 1,19 100312 1,23 1,2 4 100209 1,20 1,17 100401 1,20 1,20
100402 1,25
1,2 p>
3 Discusión
Según la "Farmacopea China" edición 2010 [1] "Agregue 10 ml de agua y disuélvalo con agua tibia", se encontró que algunos residuos no se podían disolver completamente, por lo que el Las condiciones de extracción de la solución de prueba en este experimento fueron. Se realizó una inspección. Los resultados muestran que se puede solucionar "20 mL,..., añadir 20 mL de acetato de etilo y refluir durante 30 min".
En este experimento se comparó n-propanol-tetrahidrofurano-agua.
[4-6]
Y metanol.
En el sistema de fase móvil de agua [8-9], se descubrió que se pueden usar cuatro tipos de ginkgólidos en ambos sistemas la separación inicial se logró en 30 minutos. Teniendo en cuenta que el n-propanol y el tetrahidrofurano son reactivos poco comunes, especialmente el tetrahidrofurano, que es altamente tóxico e irritante, la fase móvil fue metanol-agua (30:70). >Este experimento examinó el efecto de separación de los picos cromatográficos cuando la temperatura de la columna era de 25 °C, 30 °C y 40 °C. Los resultados mostraron que todos los picos cromatográficos se podían separar eficazmente.
También se estudiaron las columnas Diamonsil C18 (150 mm × 4,6 mm, 5 micrones), columnas Agilent Eclipse XDB-C18 (150 mm × 4,6 mm, 5 micrones) y Kromasil 100-5 C 18 C 65438+.
Este experimento optimizó los parámetros del detector de dispersión de luz evaporativa.
Mejoró el método de pretratamiento y el sistema de fase móvil de la cromatografía líquida. Para ahorrar la cantidad de sustancias de referencia y reactivos químicos, se utilizó extracto de hoja de Ginkgo biloba para la cuantificación, lo que proporciona una idea y una solución eficaz para la determinación simultánea de múltiples indicadores de medicamentos patentados chinos, ahorrando sustancias de referencia de la medicina tradicional china y reduciendo la salud. riesgos.
El coste real de la inspección es bajo y los beneficios son grandes. Referencia
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"Agregar agua(