Aplicación reactiva de inhibina
2. Microplaca: Seleccione el número de placas necesarias para el experimento. Las piezas restantes no utilizadas se devuelven a la bolsa original junto con el sello desecante. 1. Microplaca recubierta de anti-inhibina B recubierta con anticuerpo de la subunidad bB anti-inhibina: 96 pocillos, sellados y almacenados a 2-8°C.
2. Estándar A/diluyente de muestra: 2 ml x 1 frasco, suero fetal de ternera, que contiene 0 pg/ml de inhibina dímera b. 2-8 º en C antes de su uso, puede almacenarse en ordmc; . a -20°c se puede conservar durante mucho tiempo.
3. Estándar B-G (inhibinbstandsb-G): 1 ml Elemento B. Almacenar a 2-8' ordm en C. 2-8' ordmc antes de su uso. Se conservará durante 2 semanas. a -20°c se puede conservar durante mucho tiempo.
4. Control de inhibina: 1 ml × 2 frascos, concentraciones I y II, suero fetal bovino, que contiene concentraciones bajas y altas de dímero de inhibina A. Almacenar a 2-8' ordm en C. 2-8' ordmc antes de su uso. Se conservará durante 2 semanas. a -20°c se puede conservar durante mucho tiempo.
5. Diluyente de muestra A: 10 ml × 1 botella, 2-8 & ordm;
6. Diluyente de muestra B: 10 ml × 1 botella, 2-8 & ordm;
7. Conjugado anticuerpo-biotina (listo para usar): 10ml × 1 frasco, que contiene anticuerpo anti-inhibina A marcado con biotina. 2-8º se guarda en c.
8. Conjugado estreptavidina-enzima (listo para usar): 10ml × 1 frasco, que contiene una combinación de Streptomyces y peroxidasa de rábano picante. 2-8º se guarda en c.
9.Solución de sustrato TMB: botella de 15 ml × 1, 2-8 º almacenada en c.
10. Solución de parada: 1 frasco de 15 ml, que contiene ácido sulfúrico 0,2 M. 2-8º se guarda en c.
11. Concentrado de lavado: 100 ml × 1 botella, 2-8 º almacenado en c. Todos los reactivos deben equilibrarse a temperatura ambiente (~25 °C) y mezclarse completamente. Los estándares, los materiales de control de calidad y las muestras a analizar deben realizarse por duplicado al mismo tiempo.
1. Saca las tiras necesarias para el experimento y registra la posición de cada agujero.
2. Añadir 50 microlitros de estándar, control de calidad y muestra a analizar en los pocillos correspondientes.
3. Añadir 25ul de diluyente de muestra A a cada pocillo.
4. Añadir 25ul de diluyente de muestra B a cada pocillo.
5. Sellar la placa, agitar a 300-400 rpm y mantener a temperatura ambiente durante la noche (14-18 horas).
6. Lavar la tabla 3 veces y secar con papel absorbente.
7. Añadir 50 μl de conjugado anticuerpo-biotina a cada pocillo.
8. Sellar la placa, agitar a 500-700 rpm e incubar a temperatura ambiente durante 65438 ± 0,5 horas.
9. Lavar el plato 6 veces y secar sobre papel absorbente.
10. Añadir 50 μl de una mezcla de Streptomyces y peroxidasa de rábano picante a cada pocillo.
11. Sellar la placa, agitar a 500-700 rpm e incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos.
12. Lavar el plato 6 veces. Después del último enjuague, deje la solución de enjuague en el orificio durante 15 minutos antes de sacarla. Secar con papel absorbente.
13. Añadir 100ulTMB de solución de sustrato a cada pocillo.
14. Agitar a 500-700 rpm e incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 15-30 minutos.
15. Añadir 100ul de solución de terminación a cada pocillo.
Lee 450 nm en 16,30 minutos.
Nota: El criterio cero debe estar en blanco. Si se puede lograr una medición de longitud de onda dual, se puede leer a 600 o 620 nm y el valor de absorción de 600 (620) nm se resta de 450 nm, lo que puede reducir los errores ópticos. La sangre se recogió mediante venopunción utilizando muestras de suero. Las muestras tomadas de 2 a 8 ºc se pueden almacenar durante 24 horas, y -20 ºc o menos se pueden almacenar durante 30 días. Evite la congelación y descongelación repetidas de las muestras. No se deben utilizar muestras hemolíticas o lipídicas. Las muestras congeladas se deben descongelar y mezclar bien antes de realizar los experimentos.