Propiedades de transfección de pequeños ácidos nucleicos en células en suspensión
Excelente rendimiento de transfección de células en suspensión: la tasa positiva de transfección celular generalmente es superior al 75 % y la eficiencia de eliminación de genes es superior al 80 %;
Citotoxicidad extremadamente baja: transfección La tasa de muerte celular es inferior al 10%, lo que reduce en gran medida el impacto de la citotoxicidad en los resultados experimentales;
◎La gama de células transfectadas es amplia y la mayoría de las células en suspensión pueden obtener resultados de transfección ideales.
Introducción del producto
El reactivo de transfección de ácido nucleico pequeño de células en suspensión RFectSP es un reactivo de transfección de ácido nucleico de células pequeñas en suspensión especialmente diseñado, desarrollado con éxito por nuestro equipo de I+D sobre la base del ácido nucleico pequeño de células primarias RFectPM. Reactivo de transfección. Reactivos para la transfección de ácidos nucleicos de células pequeñas. RFectSP se puede utilizar para transfectar ARN y ADN pequeños dentro de 200 pb, como ARNip, ARN antisentido y microARN, y puede transfectar la mayoría de las células en suspensión. En la actualidad, la transfección de ácidos nucleicos en células en suspensión es un tema de investigación candente en el país y en el extranjero. Todavía faltan en el mercado reactivos de transfección comerciales verdaderamente eficaces para ácidos nucleicos pequeños en células en suspensión. RFectSP puede transfectar eficientemente la mayoría de las células en suspensión y lograr efectos ideales de eliminación de genes. Para la mayoría de las células en suspensión, la tasa de transfección positiva de RFectSP es superior al 75%, mientras que la tasa de muerte de las células transfectadas es inferior al 10%. Usar RFectSP también es muy sencillo. Primero mezcle sRNA y RFECTSP a temperatura ambiente, luego agregue la mezcla de siRNA y RFectSP directamente a las células que contienen medio de cultivo. El suero no tiene ningún efecto sobre el efecto de transfección y no es necesario agregar o reemplazar deliberadamente el medio de cultivo. Hemos solicitado patentes internacionales para la síntesis de materiales y la preparación de reactivos del reactivo de transfección de ácidos nucleicos pequeños de células en suspensión RFectSP y hemos cubierto muchos países y regiones de todo el mundo a través del PCT.
Pasos de operación: Este manual de instrucciones es adecuado para experimentos de transfección en placas de cultivo de 24 pocillos. Para cantidades para otros tamaños de placas, consulte la siguiente tabla, que muestra las cantidades y volúmenes por pocillo.
A. Inoculación celular: Inocular las células un día antes de la transfección, con 500 μl de medio de cultivo por pocillo, de modo que la densidad celular sea del 30-50% durante la transfección.
B. Preparación de la mezcla de ARNip-rfectsp:
Se diluyeron 1,6 pmol de ARNip con 50 µl de medio libre de suero.
Se diluyeron 2,2 µl de RFectSP con 50 µl de medio libre de suero. Incubar suavemente durante 5 minutos e incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Nota: Asegúrese de completar el paso tres en 25 minutos, no se demore demasiado.
3. Después de incubar durante 5 minutos, diluya el ARNip con diluyente RFectMN (volumen total 100 μl) durante 5 minutos. Mezclar suavemente e incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos.
C. Añadir la mezcla a las células cultivadas (cultivo de medio completo):
1. Añadir 100μl de la mezcla al pocillo de cultivo que contiene 0,5ml de células cultivadas. Agite la placa suavemente durante 5 minutos y agite bien durante 5 minutos.
Cultivar a 2,37 ℃ durante 48-72 h y detectar el efecto de inhibición genética. Si es necesario, se puede cambiar el medio de cultivo después de 4-6 horas de cultivo celular, pero no es necesario. La duración del tiempo de incubación depende del tipo de célula,
del gen perturbador en sí y del método de análisis. Se pueden establecer diferentes tiempos de incubación para que el experimento determine el tiempo de incubación óptimo.
Optimización de experimentos de transfección: Para mejorar la eficiencia de la transfección, es mejor optimizar las condiciones de transfección, especialmente por primera vez. Por ejemplo: placa de cultivo de 24 pocillos, ajuste la dosis de ARNip y reactivo RFectSP. La dosis de ARNip se ajusta entre 6 y 60 pmol (concentración final entre 10 y 100 nm) y la dosis del reactivo RFectSP se ajusta entre 1,0 y 3,0 µl
Puntos clave de los experimentos de transfección
l Trate de no utilizar antibióticos durante la transfección, de lo contrario provocará una mayor muerte celular;
l En el primer experimento, la dosis de ARNip se ajustó a las concentraciones finales de 10 nM, 30 nM, 50 nM, y 100 nM Experimentos posteriores Realizar correcciones basadas en los resultados experimentales.