Nuevos requisitos para artículos publicados sobre Western Blot en la nueva era (1)
A continuación, echemos un vistazo a los requisitos:
1. No se recomienda aplicar gel paralelo porque las condiciones de funcionamiento del sistema de incubación de gel paralelo y la película exfoliante son inconsistentes. , lo que afecta la precisión de la cuantificación. Por lo tanto, es mejor colocar el estándar interno y la proteína objetivo en la misma membrana de transferencia.
2. Elija un método con un amplio rango de estados y confirme la relación lineal entre la intensidad de la señal y la carga de la muestra. Por ejemplo, la quimioluminiscencia de la película tiene un rango dinámico muy estrecho y no se recomienda su uso:
Las imágenes digitales tienen un rango dinámico más amplio y una cuantificación más precisa que la película.
3. Se recomienda encarecidamente utilizar proteína total para la normalización, porque las proteínas internas se ven fácilmente afectadas por las condiciones de procesamiento y afectan los resultados cuantitativos. El uso de la cuantificación de proteínas totales puede reflejar con mayor precisión los cambios en la expresión de la proteína objetivo.
4. Envíe datos originales. Por ejemplo, revistas como "JBC", "PLOS" y "Cell" requieren datos originales.
Después de hablar sobre algunos requisitos de las revistas y diarios, ¿cómo puede el sistema de imágenes láser multiespectral de modo dual de zafiro azul cielo ayudarlo a obtener datos que cumplan con los requisitos de transferencia occidental de los diarios y revistas?
★Sapphire es un sistema de detección de fluorescencia múltiple, con hasta cuatro fuentes láser y cuatro canales de detección de fluorescencia realizados simultáneamente, lo que resulta en un flujo de trabajo más rápido y datos cuantitativos más confiables.
El método de transferencia de proteínas fluorescentes utiliza anticuerpos secundarios marcados con grupos fluorescentes para la detección. La concentración de la proteína objetivo en la membrana tiene una relación lineal con la intensidad de la señal de fluorescencia visible, logrando así una cantidad verdadera y confiable. análisis. Los tintes fluorescentes tienen diferentes espectros de emisión, lo que permite la detección de múltiples proteínas en una sola transferencia. De esta forma, la proteína diana y la proteína de referencia están en la misma membrana, lo que puede evitar el fraude de datos y facilitar su aceptación por las revistas.
Figura 1: Utilizando cuatro anticuerpos secundarios marcados con diferentes fluoróforos, se pueden detectar hasta cuatro proteínas diferentes simultáneamente. Cargando lisado de células HeLa,
antitubulina (550 nm, verde), antiactina (700 nm, rojo), anti-GAPDH (800 nm, gris),
Imagine simultáneamente con antitransferrina (490 nm, azul) sin cruce.
★El zafiro combinado con el tinte fluorescente de proteína total Azure puede normalizar y cuantificar tres proteínas objetivo y generar datos cuantitativos confiables de transferencia Western.
La normalización de la proteína total se utiliza para corregir las diferencias entre carriles y muestras. Los métodos tradicionales no pueden saber con precisión si los cambios en el valor y la intensidad de la banda gris son causados por cambios biológicos en la muestra o por inconsistencias de la muestra o diferencias en la preparación de la muestra. Las ventajas de la estandarización total de proteínas son las siguientes:
? El rango de detección lineal de proteínas totales es más amplio que el de los genes constitutivos y otros controles internos.
? Más estable en experimentos y sistemas.
? Puede eliminar eficazmente la influencia de las condiciones y sistemas experimentales en los resultados.
? Reflejan más fielmente los cambios en la expresión de la proteína diana.
Figura 2. Normalización y cuantificación de proteína total: canal rojo de tubulina, canal azul de actina, canal verde GAPDH, azul cielo/proteína total mostrada en gris.
Figura 3. Las señales de tubulina se normalizaron con proteína total para corregir errores de carga.
★Sapphire está equipado con tres diseños de detectores únicos para maximizar el rango dinámico de detección del instrumento y garantizar la precisión de los resultados.
Los detectores PMT se utilizan para la detección de luz azul y la obtención de imágenes en pantallas fluorescentes.
Los detectores APD se utilizan para detectar fluorescencia en el infrarrojo cercano, rojo y verde.
El detector CCD se utiliza para detectar quimioluminiscencia de alta sensibilidad.
(*Tecnología patentada)
★ Sapphire proporciona a las revistas datos originales de imágenes tiff de 16 bits, donde los datos tiff originales se refieren a la imagen tiff sin ningún recorte, modificación de píxeles, ajuste de contraste, etc. de las imágenes para garantizar la autenticidad y fiabilidad de los resultados.
Sapphire no solo puede detectar membranas de transferencia fluorescentes y membranas de transferencia de quimioluminiscencia, sino que también realiza imágenes intracelulares de pozo occidental de muestras marcadas con isótopos, geles en gel, DIGE 2D y 2D, escaneo de secciones, imágenes de tejidos, animales. e imágenes de plantas e imágenes de pantallas de fósforo.