¿Cuáles son las tecnologías clave en el funcionamiento básico de TLC? ¿A qué debo prestar atención en cada operación?
La cromatografía en capa fina consiste en cubrir uniformemente una capa de adsorbente o apuntalante sobre una placa de vidrio limpia (de unos 10×3 cm). Después del secado y la activación, use una boquilla plana para dejar caer la solución de muestra en la línea de inicio aproximadamente a 65438 ± 0 cm de un extremo de la placa de capa delgada. Después de secar al aire o con secador, coloque la placa de capa delgada en un tanque de agente revelador que contenga revelador. Agente de revelado y sumérjalo a una profundidad de 0,5 cm. Cuando el borde frontal del agente de revelado esté aproximadamente a 65438 ± 0 cm de la parte superior, saque la placa de cromatografía, séquela, rocíe el revelador o revele bajo una lámpara UV.
Notas:
1. Tableros de pavimentación de capa fina: el homogeneizado utilizado para los tableros de pavimento no debe ser demasiado grueso ni demasiado fino: si es demasiado grueso, el tablero se romperá fácilmente. debido al arrastre o detención, la delaminación es demasiado delgada y la superficie del tablero quedará rugosa después de que el agua se evapore. La proporción homogénea es generalmente gel de sílice G: agua = 1:2 ~ 3, gel de sílice G: solución acuosa de carboximetilcelulosa sódica = 1:2. Según la experiencia, el tiempo para moler la lechada homogeneizada está relacionado con la humedad del aire. Generalmente se juzga por el goteo de la lechada homogeneizada al recoger la varilla de molienda. Cuanto más espeso es, más difícil es que gotee. La consistencia del homogeneizado no sólo afecta la suavidad de la placa, sino que también afecta el espesor del recubrimiento de la placa, lo que afecta aún más la carga de la muestra. Una capa delgada facilita la sobrecarga; una capa gruesa hace que el color sea menos obvio. Generalmente, la calidad de la placa tiene poco efecto en la identificación por TLC, pero los efectos más importantes son la preparación del revelador y la saturación del sistema revelador. 2 Muestreo: Intente utilizar tubos de muestreo pequeños. Si tiene suficiente paciencia, lo mejor es utilizar únicamente tubos de muestreo de 1 μl. Estas manchas tienen manchas pequeñas y el cromatograma ampliado tiene buena resolución y colores distintos. Cuanto menor sea el contenido de agua de la solución de muestra, mejor. La solución de muestra tiene un gran contenido de agua y una gran dispersión puntual. Los disolventes de las soluciones de muestra son generalmente etanol absoluto, metanol, cloroformo y acetato de etilo. Seque la hoja terminada con aire caliente de un secador de pelo o colóquela en la secadora. Cuando se utiliza TLC para la cuantificación, el muestreo es la principal fuente de error. Los disolventes de la solución de prueba tienen distintos grados de capacidad de elución, por lo que la muestra puede expandirse en un anillo en el origen durante el muestreo. La difusión del diámetro del origen promueve esta expansión, lo que Kaiser llama "el efecto de carga de la cromatografía en anillo". " Si la muestra es muy soluble en el disolvente, el origen se convierte en un anillo hueco. Este efecto tiene un impacto muy negativo en el primer desarrollo posterior. El disolvente residual en la solución de prueba también puede cambiar la selectividad del revelado, especialmente cuando la polaridad del disolvente en la solución de prueba es significativamente diferente de la del agente revelador. Además, no se puede subestimar el impacto del disolvente hidrófilo que permanece en el origen absorbiendo la humedad en la atmósfera (especialmente en ambientes de alta humedad) en la cromatografía. Por lo tanto, se requiere un secado simultáneo o un secado posterior para eliminar el disolvente residual en la fuente. Pero se debe evitar en la medida de lo posible el calentamiento a alta temperatura. Por ejemplo, después de que la muestra se vuelve sólida, parte o la totalidad de ella quedará fuertemente adsorbida en las partículas del adsorbente, lo que promoverá reacciones químicas en la superficie activa catalítica del gel de sílice, lo que provocará la desnaturalización de la muestra (especialmente sustancias térmicamente inestables). Al menos, la fase móvil disolverá esta parte de la muestra a una velocidad mucho más lenta que la velocidad de movimiento durante el desarrollo, lo que dará como resultado una cola (una de las causas de la cola puntual).
3. Preparación del agente revelador: seleccione una herramienta de medición adecuada, mueva los disolventes de cada componente al embudo de decantación, agite vigorosamente para mezclar completamente la solución mezclada y luego déjela reposar. Si se aplica en capas, utilice la capa más grande como revelador. No se recomienda en absoluto verter las soluciones de los componentes en el tubo de desarrollo y agitar el tubo de desarrollo para preparar el revelador. Una mezcla no homogénea y la falta de separación de los agentes reveladores pueden provocar un fracaso total de la cromatografía. La precisión proporcional de cada disolvente tiene diferentes requisitos para diferentes tareas analíticas, y la precisión de los instrumentos de laboratorio debe ser lo más alta posible. Por ejemplo, se debe utilizar una pipeta de etiqueta única de 1 ml para pipetear 1 ml de disolvente, y la pipeta debe cumplir con los requisitos de certificación de metrología, aunque en la mayoría de los casos esto no es necesario. La saturación del sistema de expansión generalmente utiliza un cilindro de expansión de doble tanque, un tanque se usa para contener el revelador y al otro tanque se le puede agregar amoniaco o ácido sulfúrico. Coloque la hoja a desplegar sobre la plataforma entre las dos ranuras, colóquela sobre el marco inclinado y cubra el cilindro de despliegue.
Deje que el vapor del revelador llene el tubo de revelado y sature el vapor absorbido por la placa de capa delgada para evitar efectos de borde. El tiempo de saturación es de aproximadamente media hora. Al desplegarla, es inevitable abrir la tapa y colocar la placa de TLC en el agente revelador. Sin embargo, esto tiene poco efecto en el equilibrio de adsorción entre la placa de TLC y el vapor. Por supuesto, la acción debe ser lo más ligera y rápida posible. . 5 Control de temperatura y humedad La temperatura y la humedad tienen una gran influencia en las capas finas. Bajo la premisa de no congelarse, cuanto más baja sea la temperatura, mejor será la separación. Los más difíciles de separar, como los ginsenósidos, deben separarse a bajas temperaturas. Se estima que la influencia de la humedad afecta principalmente la capacidad de adsorción de la placa de capa delgada, lo que resulta en cambios en la selectividad (el factor de capacidad debe determinarse en función de las condiciones reales). Utilice un aire acondicionado o un congelador para controlar la temperatura y utilice otro tanque para contener ácido sulfúrico de la concentración correspondiente para controlar la humedad. 6. Métodos generales de desarrollo de color para cromatografía de capa fina Los métodos generales de desarrollo de color incluyen principalmente: 1. Método de irradiación ultravioleta: conveniente y no daña la muestra 2. Método de vapor de yodo: fuerte universalidad y la combinación con el método ultravioleta; más sensible que los dos métodos solos; 3. Reactivo fluorescente: crea un fondo fluorescente para que se puedan identificar sustancias no fluorescentes bajo la luz ultravioleta, y las sustancias fluorescentes son más evidentes 4. Disolvente de ácido sulfúrico: eficaz para la mayoría de las sustancias orgánicas; pero destructivo.