Aplicación de la tecnología transgénica
Los animales genéticamente modificados se refieren a un tipo de animal en el que genes extraños están integrados de manera estable en genes cromosómicos y pueden expresarse de manera estable mediante experimentos. Desde 65438 hasta 0974, Jaenisch obtuvo con éxito ratones transgénicos de ADN SV40 mediante microinyección por primera vez en el mundo. Luego, Costantini inyectó el gen de la globina de conejo en óvulos de ratón fertilizados, lo que provocó que los huevos fertilizados se desarrollaran en ratones y expresaran globina de conejo. Palmiter y otros introdujeron genes de la hormona del crecimiento de rata en óvulos fertilizados de ratón para obtener "súper" ratones; Church obtuvo la primera vaca transgénica. Hasta ahora, se han obtenido con éxito ratones, pollos, cabras, cerdos, ovejas, vacas, ranas y una variedad de peces transgénicos.
1. Tecnología animal transgénica
Microinyección procariótica 1.1
También conocida como microinyección de ADN, es decir, se inyectan genes exógenos directamente con una jeringa a través de un micromanipulador. Inyectados en óvulos fertilizados, los genes extraños se integran en el ADN y se desarrollan en animales transgénicos. Sus fundadores son Jaenisch y Mintz. Gordon et al. y Palmiter et al. obtuvieron sucesivamente animales transgénicos mediante este método. Este método se utiliza ampliamente en la actualidad y la investigación con animales transgénicos se basa principalmente en Palmiter y otros métodos. Wang (1996) informó sobre el uso de microinyección para introducir el gen de la nucleasa del virus anti-peste en conejos para obtener conejos transgénicos. KrimPenfort obtuvo ganado transgénico mediante cultivo de embriones in vitro y microinyección.
La característica de este método es que la eficiencia de introducción e integración de genes extraños es alta, no se necesita ningún vector para transferir directamente el gen objetivo y la longitud del gen objetivo puede ser de hasta 1,2. Vector de virus de transcripción método
Recombinar el gen objetivo en un vector retroviral para producir partículas de virus de alta concentración e infectar artificialmente el embrión antes o después de la implantación, o incubar directamente el embrión con una célula de cultivo monocapa que pueda liberar retrovirus para lograr Infección El objetivo es insertar el gen extraño de interés en el ADN genómico del huésped a través del virus. Mediante este método, Slater y otros obtuvieron pollos transgénicos y Haskell obtuvo ganado transgénico.
El retrovirus modificado mediante tecnología de ADN recombinante tiene una aplicación superior a la microinyección: no se requiere reordenamiento y se puede integrar una única copia del gen transferido en el punto de integración del embrión en un virus de alta concentración; contenedor, o cocultivado con células infectadas in vitro, o microinyectado en el blastodermo de pollo, la tasa de embriones de ADN retroviral integrado es mayor. Las desventajas son: se necesitan transgenes para producir retrovirus; el gen insertado en el retrovirus tiene un cierto límite de tamaño; el ganado transgénico obtenido tiene un alto quimerismo, lo que requiere una gran cantidad de cruces para establecer líneas transgénicas; sido solucionado.
1.3 Las células madre embrionarias (células ES para abreviar) introducen genes en los embriones; luego, después de que las células se inyectan en blastocistos animales, los embriones transgénicos pueden participar en la formación del embrión del huésped, formando quimeras hasta que se logran las quimeras de especie. . Por tanto, puede utilizarse como vector para introducir genes extraños y obtener animales transgénicos. Es una línea celular pluripotente establecida a partir de la masa celular interna de embriones tempranos mediante cultivo in vitro.
La ventaja es que antes de trasplantar células madre embrionarias a embriones, se pueden seleccionar genotipos específicos in vitro; después de la transfección de ADN exógeno, los embriones se pueden clonar en las células y luego seleccionar para que contengan ADN exógeno integrado a través de la célula. Mediante la fusión de células se pueden obtener muchos animales transgénicos genéticamente idénticos. La desventaja es que las células germinales de muchos animales transgénicos quiméricos no contienen el transgén;
Actualmente, la aplicación de métodos mediados por células embrionarias en ratones ha madurado, pero su aplicación en animales grandes ha sido tardía. Evans et al. (1981) utilizaron diferentes sistemas de cultivo para aislar y establecer clones de células madre pluripotentes a partir de la masa celular interna de blastocistos de ratón. Stice y Strelchenko et al. (1996) obtuvieron células madre embrionarias bovinas.