¿Cuál es el principio de detección del analizador de coagulación?
Coagulación (método biofísico)
También se puede llamar método biofísico al método de coagulación, que detecta cambios en una serie de cantidades físicas (luz, electricidad, movimiento mecánico, etc.). ) procesa el plasma bajo la acción de activadores de la coagulación y luego analiza los datos obtenidos por computadora y los convierte en el resultado final.
A. Método actual
El método actual consiste en utilizar las características del fibrinógeno de ser no conductor y de la fibrina de ser conductora, y utilizar la muestra a analizar como parte del método. Circuito Según la corriente del circuito durante el proceso de coagulación cambia para determinar la formación de fibrina. Sin embargo, debido a la falta de fiabilidad y la unicidad del método actual, fue rápidamente eliminado por métodos ópticos más sensibles y escalables.
B. Método óptico (turbidimetría)
El medidor de coagulación óptico mide la función de coagulación en función del cambio en la turbidez durante el proceso de coagulación.
El estado de coagulación de la muestra se juzga en función del cambio de luz durante el proceso de coagulación de la muestra a analizar. Cuando se agrega un coagulante a una muestra, la intensidad de la luz de la muestra aumenta gradualmente a medida que se forma un coágulo de fibrina en la muestra. El instrumento describe este cambio óptico como una curva de solidificación y la intensidad de la luz no cambia una vez que la muestra se solidifica por completo. Por lo general, el punto inicial de solidificación es el 0%, el punto final de la solidificación es el 100% y el 50% es el tiempo de solidificación. El detector de luz recibe este cambio de luz, lo convierte en una señal eléctrica, la amplifica y luego la transmite al monitor para procesarla y dibujar una curva de coagulación.
Las ventajas de las pruebas ópticas de coagulación son su alta sensibilidad, su estructura simple del instrumento y su fácil automatización. La desventaja es que las anomalías ópticas de la muestra, la suavidad de la copa de prueba y las burbujas en la muestra se convertirán en factores de interferencia en la medición.
C. Método de la perla magnética
El primer método de la perla magnética consistía en colocar una perla magnética en la copa de detección y pegarla en línea recta con una varilla de metal ferromagnético fuera de la copa. Una vez coagulada la muestra, las perlas magnéticas se alejan de la varilla metálica debido a la formación de fibrina y el instrumento detecta el punto final de la coagulación basándose en esto. Este instrumento también puede denominarse método de perlas magnéticas planas. El primer método de perlas magnéticas planas puede superar eficazmente el problema de la interferencia de fondo de la muestra en los métodos ópticos, pero tiene la desventaja de una baja sensibilidad.
El método moderno de perlas magnéticas apareció a finales de los años 1980 y entró en comercialización a principios de los años 1990. El método moderno de perlas magnéticas se denomina método de perlas magnéticas dobles. El principio de prueba del método de perlas magnéticas de doble circuito magnético es: hay un conjunto de bobinas impulsoras en ambos lados de la copa de prueba, que genera un campo electromagnético alterno constante, de modo que la bola de acero desmagnetizada especial en la copa de prueba mantiene una amplitud constante. oscilación. Después de agregar el activador de la coagulación, a medida que aumenta la cantidad de producción de fibrina, aumenta la viscosidad del plasma y la amplitud del movimiento de la pequeña bola de acero se debilita gradualmente. El instrumento determina el punto final de solidificación cuando la amplitud del movimiento se atenúa al 50% en función de los cambios en el movimiento de la pequeña bola de acero detectados por otro conjunto de bobinas de medición.
Método cromogénico del sustrato (método bioquímico)
El método cromogénico del sustrato estima el contenido y la actividad de la sustancia que se está probando midiendo el cambio de absorbancia del sustrato cromogénico. También se puede utilizar. Se llama método bioquímico. El canal de detección utiliza una lámpara halógena como fuente de luz de detección y la longitud de onda es generalmente de 405 nm. El detector está alineado con la fuente de luz, similar a un colorímetro.
El principio del medidor de hemaglutinación que utiliza sustratos cromogénicos para detectar trombos e índice hemostático es sintetizar artificialmente un pequeño péptido con una secuencia de aminoácidos similar al factor de coagulación natural y con un sitio de acción específico, y combinar los Los genes químicos cromogénicos hidrolizables están unidos a aminoácidos en el sitio de acción. Debido a que el factor de coagulación tiene actividad proteolítica, no solo puede actuar sobre las cadenas peptídicas de proteínas naturales, sino también sobre sustratos de cadenas peptídicas sintéticas, liberando así genes de color y haciendo que la solución tenga color. El tono de color producido es directamente proporcional a la actividad del factor de coagulación, por lo que puede cuantificarse con precisión. Actualmente existen decenas de sustratos peptídicos sintéticos, el más utilizado es la p-nitroanilina (PNA), que es de color amarillo y se puede medir a una longitud de onda de 405 mm.
Métodos inmunológicos
En los métodos inmunológicos, se utilizan sustancias purificadas como antígenos para preparar los anticuerpos correspondientes y luego las sustancias se determinan cualitativa y cuantitativamente mediante reacciones antígeno-anticuerpo. Los métodos más utilizados son:
A. Método de inmunodifusión. La sustancia a analizar se combina con el anticuerpo correspondiente en un medio determinado, se mide el tamaño del anillo de precipitación y, en comparación con el estándar, se calcula la concentración de la sustancia a analizar.
Este método es sencillo de utilizar y no requiere equipo especial, pero lleva demasiado tiempo y tiene baja sensibilidad. Sólo es adecuado para la detección de factores de coagulación con alto contenido.
B. Electroforesis de flechas. Bajo un determinado campo eléctrico, la sustancia de prueba en el soporte de gel se combina con su anticuerpo correspondiente para formar un "pico de cohete", y la altura del pico de cohete es proporcional a su contenido. Las alturas de los picos se miden y se comparan con estándares para una determinación cuantitativa. Este método es complejo de operar y tiene pocas aplicaciones clínicas.
C. Inmunoelectroforesis bidimensional. Algunos factores de coagulación con estructuras moleculares anormales pueden separarse mediante electroforesis tanto en dirección horizontal como vertical.
D. Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Utilice un antígeno o anticuerpo marcado con enzima para realizar una reacción de unión al antígeno con la sustancia de prueba. Retire el antígeno o anticuerpo no unido y las sustancias que interfieren en la muestra mediante lavado, dejando el complejo antígeno-anticuerpo fijado en la pared del tubo. Luego agregue el sustrato enzimático. y La sustancia cromogénica reacciona para producir una sustancia coloreada, que se mide con un lector de microplacas. La profundidad del color es proporcional a la concentración de la sustancia que se detecta. Este método tiene alta sensibilidad y especificidad y se ha utilizado para detectar muchos componentes hemostáticos y trombóticos.
Método inmunoturbidimétrico. El objeto de prueba se mezcla con su anticuerpo correspondiente para formar un complejo, lo que da como resultado partículas precipitadas suficientemente grandes según lo determinado por la turbidez de transmisión o la turbidez de dispersión. El método es simple, preciso y fácil de automatizar.