Tecnología de detección para pruebas de ácido nucleico del VIH
El método de las perlas magnéticas se utiliza para la extracción de ácidos nucleicos.
1) Principio de extracción de perlas magnéticas:
Las perlas magnéticas se marcan con sustancias que adsorben específicamente ácidos nucleicos para adsorber específicamente ácidos nucleicos, y los ácidos nucleicos virales se extraen del lisado. mediante tecnología de separación magnética.
2) Pasos:
Craqueo - adsorción - lavado - lavado - lavado - elución
3) Ventajas:
a. la extracción de perlas tiene una alta especificidad, se ve menos afectada por los factores de la muestra y tiene una alta sensibilidad
b Fácil de automatizar
4) Desventajas:
a. costo y requiere ciertos instrumentos (semiautomático, completamente automático).
b. Trabajo completamente manual, la carga de trabajo es demasiado grande. Los cebadores anidados de la reacción en cadena de la polimerasa (nPCR) se diseñaron basándose en las secuencias de los genes gag.pol y env del VIH-1. El lisado de células mononucleares de sangre periférica se amplifica primero con cebadores externos, el producto se amplifica con cebadores internos y los resultados se determinan directamente mediante electroforesis en gel. sensibilidad de la nPCR. Es de 100 a 1000 veces más alto que la PCR convencional y puede detectar genes del VIH en 0,5 fg de ADN plasmídico y 50 μ1 de muestras de sangre periférica de personas infectadas por el VIH-1.
Según la literatura profesional, 63 personas infectadas por VIH-1 analizadas con este método dieron positivo, mientras que 61 personas sanas y sospechosas dieron negativo. Estos últimos fueron descartados para VIH-1 mediante el seguimiento. Prueba de anticuerpos.
Se puede ver que nPCR es una tecnología de detección del gen VIH-1 con una sensibilidad extremadamente alta, una fuerte especificidad y una operación simple y fácil. Ya ha desempeñado un papel importante en el diagnóstico temprano y la detección del contenido de virus en sangre periférica, y tiene perspectivas de aplicación más amplias.
Ventajas de las pruebas
Después de que un ser humano se infecta con el VIH, generalmente pasan de 2 a 12 semanas, y un promedio de aproximadamente 42 días, antes de que se puedan detectar los anticuerpos del VIH en el sangre. Durante este período, la tecnología de prueba convencional no puede detectar el virus del VIH en absoluto. Esto a menudo se denomina "período de ventana del VIH". La existencia del "período ventana" también explica por qué algunos pacientes se infectan con el SIDA después de recibir transfusiones de sangre en hospitales regulares.
Durante el proceso de infección lo primero que aparece es el ARN viral, que se puede detectar mediante PCR, luego aparecen los anticuerpos IgM, que se pueden detectar mediante el método del sándwich de doble antígeno. Los anticuerpos IgG se pueden detectar mediante métodos indirectos.
Los métodos de detección utilizados actualmente por los centros de control de enfermedades provinciales y municipales y las tiras reactivas detectan antígenos de anticuerpos, lo que no puede evitar la interferencia del factor "período de ventana del VIH". Por lo tanto, la tecnología de prueba convencional tiene fallas importantes durante el período ventana del VIH.