Principios y aplicaciones de la espectroscopia de proteínas (2)

Parámetros de rendimiento del espectrómetro de masas

Como usuario de un espectrómetro de masas, ¿cómo evalúa el rendimiento de un espectrómetro de masas? En otras palabras, ¿cómo elegimos un espectrómetro de masas? Los principales parámetros de rendimiento del espectrómetro de masas se muestran a continuación. Permítanme explicarles qué significan a su vez estos nombres altos de parámetros.

Capacidad de detección

La definición "oficial" es la cantidad de material equivalente a tres veces el ruido, que podemos entender como la menor concentración o cantidad de compuesto que puede ser detectado por el espectrómetro de masas. Para compuestos por debajo de este valor, el espectrómetro de masas no tiene poder.

¿Cómo sé el límite de detección de mi espectrómetro de masas? Normalmente utilizamos reserpina como compuesto estándar para determinar el límite de detección del espectrómetro de masas. Por ejemplo, si inyectamos 50 fg (Fick) de reserpina en el espectrómetro de masas, si la relación señal-ruido que obtenemos puede alcanzar 100-1000, entonces podemos pensar que el límite de detección de este espectrómetro de masas es bueno. 50 fg de reserpina solo contienen decenas de miles de moléculas de reserpina. En otras palabras, si se pueden detectar compuestos que contienen decenas de miles de moléculas pequeñas, entonces la sensibilidad de este espectrómetro de masas es bastante alta. Puede pensar que la sensibilidad y el límite de detección evalúan el mismo rendimiento.

Rango lineal

Este parámetro de rendimiento también es importante. Indica el rango de concentración dentro del cual existe una relación lineal entre la señal detectada por el espectrómetro de masas y la concentración de la muestra. En pocas palabras, es más apropiado utilizar este espectrómetro de masas para detectar muestras dentro de este rango de concentración. Las muestras por encima o por debajo de este rango de concentración deben concentrarse o diluirse antes de que puedan ser detectadas por el espectrómetro de masas.

Normalmente el rango lineal de un espectrómetro de masas es de 3-6 órdenes de magnitud, es decir, 1.000-1.000.000. El rango de la mayoría de los espectrómetros de masas es de 1.000 a 10.000.

Este parámetro es importante porque cuando el contenido de la muestra que analizamos está en un rango amplio, por ejemplo, algunas muestras son sólo decenas de microgramos/ml, mientras que otras pueden llegar a varios mg/ml. Dentro de este amplio rango de concentración, si el rango lineal del espectrómetro de masas es muy bueno, podemos inyectar muestras directamente sin concentrar muestras de baja concentración ni diluir muestras de alta concentración, lo que puede reducir en gran medida la complejidad del pretratamiento de la muestra, ahorrando tiempo y pasos experimentales. .

Resolución y precisión de masa

Son dos parámetros muy importantes. La espectrometría de masas de alta resolución a la que a menudo nos referimos se refiere a una resolución extremadamente alta y una precisión de alta calidad. ¿Cómo entender estos dos parámetros? Primero echemos un vistazo a la siguiente imagen:

Tasa de descomposición

Lo que el espectrómetro de masas puede distinguir es la diferencia de masa entre los dos últimos picos del espectro de masas.

¿Qué significa esto? Digamos que tengo dos picos del espectro de masas con la misma intensidad. Cuando dos picos están muy cerca, ¿bajo qué circunstancias puedo juzgar claramente que son dos picos en lugar de uno? La regla básica es que cuando la altura de la superposición entre los dos picos no excede 10 veces la altura de cualquier pico del espectro de masas, consideramos que los dos picos son separables. Por otro lado, si el solapamiento entre dos picos supera 10, se consideran inseparables, es decir, el espectro de masas no se puede procesar como dos picos.

Cuando la separación inicial de dos picos es 10, medimos el ancho del medio pico de cualquier pico del espectro de masas (es decir, el ancho del medio pico en la altura del pico) y luego dividimos la masa. relación carga-carga de cualquier pico por La mitad del ancho máximo proporciona la resolución. En la actualidad, la resolución de los espectrómetros de masas de alta resolución puede alcanzar el orden de 50.000 a 100.000, y el cuadrupolo general puede alcanzar el orden de 5.000 a 10.000.

Entonces, ¿cómo se manifiestan las ventajas de la espectrometría de masas de alta resolución? Tome la imagen de arriba a la derecha como ejemplo. Cuando detectamos una sustancia con un espectrómetro de masas de baja resolución, sólo podemos obtener el pico más externo del espectro de masas azul. A medida que continuamos mejorando la resolución, encontraremos gradualmente que este pico del espectro de masas en realidad contiene varios picos pequeños del espectro de masas. La relación masa-carga obtenida por el espectrómetro de masas de alta resolución y la relación masa-carga obtenida por. el espectrómetro de masas de baja resolución son muy diferentes. Esta es información muy importante para la identificación de compuestos. Si calculamos la relación masa-carga incorrecta, nos resultará difícil identificar la proteína correcta.

La siguiente figura también puede indicarnos intuitivamente las ventajas de la detección por espectrometría de masas de alta resolución.

Por ejemplo, si escaneamos un compuesto con una resolución de 17500, encontraremos un pico de espectro de masas muy gordo con una relación masa-carga de 280,09 (marcado con un círculo rojo en el primer espectro). ). Podríamos pensar que es un compuesto, así que comenzaremos a identificar el compuesto. Sin embargo, cuando continuamos mejorando la resolución del espectrómetro de masas hasta cierto punto, encontraremos que en realidad se trata de dos picos diferentes (marcados con un círculo rojo en el cuarto espectro).

En otras palabras, la información obtenida al utilizar la relación masa-carga obtenida en espectrometría de masas de baja resolución para identificar compuestos es en realidad incompleta (no necesariamente incorrecta), mientras que a través de espectrometría de masas de alta resolución, Podemos obtener información más completa sobre el compuesto para ayudarnos a tomar decisiones correctas.

Exactitud de masa

Se refiere a la diferencia entre la relación masa-carga medida por el espectrómetro de masas y su relación masa-carga real, dividida por el producto de su relación masa-carga real. relación masa-carga y 1.000.000. Entonces la unidad es ppm (partes por millón), lo que parece más conveniente. La precisión de masa actual de los espectrómetros de masas de alta resolución se encuentra en el rango de 2 a 5 ppm.

Entonces, ¿cómo medimos la resolución real y la precisión de masa de un espectrómetro de masas? Tomemos como ejemplo los datos experimentales del profesor Qin Li:

Por ejemplo, si seleccionamos un pico con una relación masa-carga de 511,6 y calculamos que su ancho de medio pico es 0,012, entonces su La resolución es 511,6 dividido por 0,012 y el valor es 42500, mientras que la resolución dada por el software es 48.

Mismo ejemplo, calculemos la precisión de la masa. La relación masa-carga medida es 511,5978, y la relación masa-carga real de este pico es 511,5995, por lo que la desviación de masa calculada es 3,3 ppm, lo que significa que el error de este experimento es 3,3 ppm. suele ser aceptable.

La importancia de la resolución puede ser fácil de entender, pero ¿cómo afecta la precisión de la masa a la identificación de compuestos? Tomemos como ejemplo la reserpina.

La molécula de reserpina tendrá un pico en el espectro de masas de 609,066 en el espectro de masas. Cuando utilizamos un solo quad para analizar la reserpina, la precisión de la masa de un solo quad es de aproximadamente 0,1 unidades de masa (165 ppm). En otras palabras, cuando se inyecta reserpina en un espectrómetro de masas cuadrupolo, el espectrómetro de masas cuadrupolo nos dirá que la relación masa-carga de este compuesto está aproximadamente en el rango de 609,2-609,4.

¡Entonces aquí viene el problema! En el rango de 609,2-609,4, ¿cuántos compuestos podemos combinar con los cuatro elementos C, H, O y N? La respuesta es: ¡209 especies! En otras palabras, si queremos juzgar si este compuesto es reserpina, ¡la posibilidad de obtener el resultado correcto es sólo de 1/209!

A medida que continuamos mejorando la precisión de la masa, hay cada vez menos compuestos posibles que se pueden combinar. Cuando la precisión de la masa alcanza las 3 ppm, sólo hay cuatro compuestos posibles. Cuando llega a 2 ppm, sólo quedan dos posibles compuestos. En este momento, determinaremos si el compuesto es reserpina, por lo que la precisión será mucho mayor. Es por eso que la espectrometría de masas de alta resolución es muy importante para la identificación de compuestos, lo que puede reducir en gran medida la cantidad de compuestos candidatos y mejorar la tasa de éxito de la identificación.

Se puede decir que la resolución y la desviación de masa evalúan la precisión y exactitud del espectrómetro de masas respectivamente. Al igual que al disparar, por ejemplo, si puedo acertar en la esquina superior derecha cada vez, significa que la precisión del disparo es muy alta, pero si mi objetivo es la diana, significa que la precisión es pobre. En otra situación, por ejemplo, si golpeo el objetivo varias veces, los puntos de golpe están dispersos, uno hacia el este y otro hacia el oeste, pero la posición promedio está exactamente en la diana. Se puede considerar que la precisión de la calidad es buena, pero la precisión es relativamente pobre. Entonces lo que queremos es que el espectrómetro de masas sea muy preciso y muy exacto.

Los espectrómetros de masas de alta resolución que podemos utilizar actualmente, ya sean de la serie QTOF u Orbitrap, pueden alcanzar una resolución de más de 50.000 y una precisión de masa de 2-3 ppm. ¡Así que los niños que investigan la proteómica son mucho más felices que antes!

He compartido contigo varios parámetros importantes para evaluar un espectrómetro de masas. A continuación haremos un resumen general del rendimiento de los diferentes espectros de masas.

1. Cuadrupolo y trampa de iones: su rango de escaneo masivo es limitado, generalmente 10-4000. Por encima de 4000, el cuadrupolo y la trampa de iones solo se pueden usar para la transmisión de iones, no para la detección de iones. Su resolución es generalmente de 2000 a 4000, y las mejores trampas de iones pueden alcanzar 10000-20000. La velocidad de escaneo no es muy rápida. Su ventaja es que el precio es muy bajo y todo el instrumento se puede fabricar en un tamaño muy pequeño.

2.TOF: Su mayor ventaja es que el rango de masa medible puede ser teóricamente infinitamente grande o infinitamente pequeño. Si el ion a detectar no tiene masa, su tiempo de vuelo será cero, por lo que se podrán detectar iones con una relación masa-carga igual a cero. De manera similar, si la masa de un ion es infinita, su tiempo de vuelo también lo es y teóricamente puede detectarse. La resolución de TOF es 5000-60000 y la velocidad de escaneo es muy rápida. Su desventaja es que TOF requiere una pista de iones larga, por lo que el instrumento será muy grande.

3.FTICR: La ventaja es que la resolución es muy alta, pudiendo llegar a 1.000.000 o incluso más. Las desventajas son que la velocidad de escaneo es relativamente lenta, requiere un imán superconductor, su funcionamiento es muy costoso y el espectrómetro de masas FTICR en sí también es muy costoso, generalmente por encima de los 10.000 dólares.

4. Trampa Orbital: Superando la deficiencia de que FTICR debe utilizar imanes superconductores. Su resolución puede alcanzar 65,438 000,000 a 65,438 0,000,000, la velocidad de escaneo no es muy rápida y el precio es más bajo que el FTICR. Está protegido por patente y actualmente sólo Thermo Fisher puede producirlo.

Para la investigación de proteómica, nuestros requisitos mínimos para el rendimiento del espectrómetro de masas son: la resolución debe alcanzar al menos 40000-50000, la precisión de la masa debe ser mejor que 5 ppm, el rango de escaneo de masas debe alcanzar 100-3000 y la velocidad de escaneo debe ser de 100-3000. por segundo se debe alcanzar al menos un espectro primario de alta resolución y diez espectros secundarios de alta resolución. Si se cumplen las condiciones anteriores, se cumplen los requisitos más básicos de la histología de proteínas.

Espectrometría de masas en tándem

Las ventajas y desventajas de varios espectrómetros de masas se mencionan anteriormente, por lo que aquí se introduce el concepto de espectrometría de masas en tándem: los mismos o diferentes espectrómetros de masas están conectados en serie. para lograr operación en serie o en paralelo. Esto tiene dos propósitos: generar iones de fragmentos secundarios (¿por qué se generan iones de fragmentos secundarios? Hablaremos de ello más adelante) y aprovechar las ventajas complementarias de diferentes espectrómetros de masas.

Sabemos que el rendimiento de diferentes espectrómetros de masas es diferente. Por ejemplo, la espectrometría de masas de cuadrupolo puede lograr la selección de iones, pero la resolución es relativamente pobre, mientras que TOF no puede lograr la selección de iones, pero la resolución es relativamente alta. Entonces, ¿podemos unir espectrómetros de masas con diferentes rendimientos y hacer que funcionen juntos? Normalmente utilizamos espectrometría de masas en tándem o MS-MS para lograr este requisito. Hay muchas formas de combinarlos:

La primera: un triple quad, o quad en serie, son tres quads conectados en serie. El objetivo principal de esto es lograr un escaneo por espectrometría de masas secundaria.

El segundo tipo: un cuadrupolo conectado en serie con un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo, que es lo que escuchamos a menudo. De hecho, es para mejorar la resolución del espectrómetro de masas secundario.

El tercer tipo: la combinación de una trampa orbital y un cuadrupolo, como la fusión orbitrap, o la combinación de una trampa orbital y una trampa de iones, como la élite orbitrap, es una combinación de este tipo.

Primero hablemos de cómo utilizar un espectrómetro de masas en tándem para obtener iones de fragmentos secundarios.

Lo anterior es un diagrama esquemático de la estructura de una varilla en serie de cuatro niveles. Un quad tándem, o triple quad, consta de tres quads conectados en serie. Por lo general, el segundo nivel cuatro se reemplaza por un nivel seis o un nivel ocho, pero todavía lo llamamos nivel cuatro. Este cuadrupolo no es un sistema selectivo de masas, sino una celda de colisión, o celda de colisión, que se utiliza para fragmentar iones.

Cuando los cuadrupolos en serie están funcionando, el primer cuadrupolo activa el modo de masa selectiva, lo que permite que los iones con una relación masa-carga específica pasen a través del espectrómetro de masas mientras expulsan todos los demás iones (al cuadrupolo). ). en el polo o en el espacio cuadrupolo). Luego, cuando se selecciona un ion específico (llamado ion precursor), ingresa a la celda de colisión.

Existe una estructura en la celda de colisión donde hay una diferencia de voltaje entre la entrada y la salida. Normalmente, el voltaje de entrada será mayor que el voltaje de salida.

Cuando entran iones precursores, la diferencia de voltaje los acelera. Además, la celda de colisión se llenará con helio o nitrógeno. Cuando los iones se aceleran, chocan y se rompen con las moléculas de helio o nitrógeno en la celda de colisión para formar algunos fragmentos, que se denominan fragmentos, es decir, iones fragmentados o iones producto. Estos iones fragmentados ingresarán al tercer cuadrupolo para una segunda exploración para obtener un espectro de masas secundario.

La siguiente imagen es un espectrómetro de masas cuadrupolo en tándem. Podemos ver que sigue siendo una estructura muy compacta.

Barras de nivel 3 y 4

Tomemos la ractopamina como ejemplo para ver qué cambios ocurrirán en sus moléculas al pasar por un espectrómetro de masas en tándem y qué tipo de espectro se obtendrá. .

La ractopamina es un fármaco veterinario. Su peso molecular es 301,1672 y su fórmula estructural se muestra en la figura anterior. En la primera imagen, la relación masa-carga medida es 302,1744, que es una exploración del espectro de masas de primer nivel. Hay un pico del espectro de masas de ractopamina en 302,1744.

Luego, le decimos al espectrómetro de masas que seleccione iones en 302.1744 y establezca el voltaje CID (disociación inducida por colisión) en 10 V, es decir, agregue una diferencia de voltaje de 10 V entre la entrada y la salida de la colisión. La celda para producir la colisión de iones se realizó con una energía de colisión de 10 V. Después de la colisión, en la segunda imagen, podemos ver que la intensidad de la señal en 302 se vuelve más débil, mientras que la intensidad de la señal en 284 y 164 se vuelve más fuerte, y también aparecen las señales nunca antes vistas en 107, 121 y 136.

A continuación, aumentamos el voltaje de colisión de 10V a 25V. Después de aumentar, encontraremos que la señal en 302 desaparece por completo, lo que indica que los iones originalmente seleccionados en el primer cuadrupolo se rompen por completo después de una colisión de alta energía y se dividen en 91, 107 y 1265438. Entonces, ¿qué son estos iones fragmentados?

A través del análisis estructural, encontraremos que corresponden a diferentes estructuras de fragmentos de ractopamina. Por ejemplo, 164 en realidad corresponde a la mitad derecha de la ractopamina, 136 corresponde a la mitad izquierda, y así sucesivamente.

Analizando las estructuras químicas de los fragmentos, podemos unirlos para formar una molécula de ractopamina completa. Así identificamos la estructura de un compuesto mediante espectrometría de masas. El proceso de identificación real suele ser más complejo y estresante. Lo anterior es sólo un ejemplo simple.

Luego, para los péptidos, o fragmentos de péptidos después de la proteólisis, podemos identificar la secuencia peptídica mediante el mismo proceso, analizando qué fragmentos teóricamente se pueden obtener del péptido y luego comparándolos con los espectros. Esta parte se discutirá en detalle más adelante. Primero veamos un ejemplo simple, como se muestra a continuación:

Por ejemplo, si tenemos un segmento peptídico en la esquina superior izquierda, teóricamente podemos obtener varios iones by marcados en gris. Mediante análisis de espectrometría de masas, se pueden encontrar los iones fragmentados correspondientes (los iones fragmentados marcados en rojo en la tabla de la derecha se encuentran todos en el espectro de masas). Al reunir esta información, podemos saber cuál es la secuencia del polipéptido.

Tomando un triple cuadrupolo como ejemplo, les compartí cómo un espectrómetro de masas en tándem obtiene iones de fragmentos secundarios y espectros secundarios. Luego, algunas otras series de espectrómetros de masas son similares.

Q-TOF

Q-TOF es en realidad muy similar a un cuadrupolo en tándem, excepto que utiliza un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo en lugar del tercer cuadrupolo. Eso significa un cuadrupolo, una celda de colisión y luego un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo. Para aumentar la distancia de vuelo, haremos que los iones regresen por turno. Esto se llama vuelo en modo de reflexión y permite que los iones vuelen más lejos en un espacio más corto.

La siguiente imagen es el espectrómetro de masas Q-TOF producido por Bruker. La longitud de su tubo de vuelo puede alcanzar los 3,6 metros y el recorrido de ida y vuelta de iones es de 7,2 metros. Puede prestar atención a este número. Lo mencionaremos nuevamente cuando hablemos del grado de vacío más adelante.

Serie Orbitrap

La serie Orbitrap es más compleja que los espectrómetros de masas en tándem ordinarios. Puede sentirlo a través del diagrama esquemático a continuación.

Esta serie tiene varias series de espectrómetros de masas, como el espectrómetro de masas Q Exactive. Su Q1 también es un cuadrupolo, Q2 es una celda de colisión y Q3 se reemplaza por una trampa orbital.

Otro ejemplo es el Orbitrap Elite. Su Q1 es la trampa de iones, Q2 es la celda de colisión y Q3 es el Orbitrap. En otras palabras, Orbitrap Elite no tiene un poste de cuarto nivel. Utiliza una trampa de iones en lugar de un poste de cuarto nivel.

Otro es Orbitrap Fusion (ver imagen a continuación), que es una combinación de tres espectrómetros de masas. Su primera etapa es un cuadrupolo, la segunda etapa es una trampa de iones y la tercera etapa es una trampa orbital. Al mismo tiempo, también tiene una unidad de colisión, que en general es una estructura muy compleja. Su característica es que la trampa orbital y la trampa de iones se pueden escanear simultáneamente.

En un espectrómetro de masas general no se pueden escanear dos volúmenes de detección de masas al mismo tiempo. Sólo se puede utilizar uno para la detección de masas y otro para el filtrado. La fusión de Orbitrap y la trampa de iones en Orbitrap pueden escanear al mismo tiempo, lo que significa que es una estructura paralela, no solo en serie, por lo que su velocidad de escaneo será más rápida y su rendimiento será mejor. La resolución de fusión puede alcanzar 240.000-960.000.

Hemos compartido varios espectrómetros de masas comunes arriba. Tomemos Q-TOF como ejemplo para aprender la estructura básica de un espectrómetro de masas.

Para un espectrómetro de masas, la parte central es el analizador de masas, que consta de dos partes, el filtro de masas y el detector de masas que presentamos en detalle anteriormente. Todas las demás partes del espectrómetro de masas sirven para esta parte central.

Además de este componente central, el espectrómetro de masas también requiere los siguientes componentes auxiliares:

Sistema auxiliar de espectrometría de masas

Sistema de vacío: ¿Por qué es un sistema de vacío? ¿necesario? Sabemos que un espectrómetro de masas es un instrumento que detecta la relación masa-carga de iones gaseosos. Cuando los iones gaseosos vuelan en el aire, chocan con las moléculas de aire, y sus cargas pueden ser eliminadas y convertirse en moléculas gaseosas sin carga, y el espectrómetro de masas ya no puede medir su relación masa-carga. Entonces esperamos que este ion gaseoso pueda existir de manera estable en el espectrómetro de masas, por lo que el espectrómetro de masas requiere un sistema de vacío para que los iones puedan volar de manera estable sin interferencias de otras moléculas de aire.

Los sistemas de vacío suelen requerir dos etapas. La primera etapa es de bajo vacío, proporcionada por una bomba mecánica o una bomba de aceite. Puede ser de 1 a 3 milibares, que es una milésima parte de la presión atmosférica. El propósito del vacío bajo es proporcionar un entorno de presión de respaldo para el vacío alto. El alto vacío lo proporciona una bomba de turbina con un grado de vacío de -1e-5 ~-1e-10 mbar. En tal ambiente de vacío, las moléculas de aire básicamente son succionadas.

Tal vez quieras preguntar, ¿por qué se requieren condiciones de vacío de este orden de magnitud?

Primero introduzcamos un concepto llamado camino libre medio del ion, que significa cuánto tiempo vuela un ion en un ambiente de vacío antes de encontrar la siguiente molécula de aire. Esto determina cuánto tiempo pueden permanecer estables los iones en el vacío.

Tomemos como ejemplo un cuadrupolo conectado en serie. El espectrómetro de masas en tándem mide aproximadamente 1 metro de largo, por lo que esperamos que los iones no golpeen otras moléculas de aire durante su vuelo de 1 metro. Por lo tanto, para las varillas cuádruples conectadas en serie, mientras se pueda mantener el vacío, no se encontrarán moléculas de aire a una distancia de 1 metro. Por lo tanto, un cuadrupolo en serie normalmente solo requiere un vacío de -1E5 mbar.

Para Q-TOF, la distancia de vuelo de los iones es de aproximadamente 5 a 7 metros (¿todavía lo recuerdas? Cuando presenté Q-TOF anteriormente, mencioné específicamente la distancia de vuelo de 7 metros), que es más rápido que un cuadrupolo conectado en serie. La distancia de vuelo es casi un nivel de datos más larga. Por lo tanto, el grado de vacío requerido por el espectrómetro de masas Q-TOF es de aproximadamente -1E-6 ~ -1E-7 milibares para garantizar que los iones no colisionen con otras moléculas de aire durante un vuelo tan largo.

Para el espectrómetro de masas Orbitrap, el tiempo de vuelo de los iones puede alcanzar 1 segundo y volarán una larga distancia, por lo que el vacío requerido por Orbitrap es -1E-10 mbar.

Sistema de fuente de iones: Necesitamos introducir la muestra de un ambiente no ionizante bajo presión atmosférica en el espectrómetro de masas para convertirla en iones gaseosos, por lo que necesitamos una fuente de iones para lograr esta función.

Sistema informático: realiza el control y recogida de datos del espectrómetro de masas.

Sistema de gas: suministro de gas y tratamiento de gases residuales (nitrógeno y argón)

Fuente de alimentación: Sistema de alimentación ininterrumpida UPS.

Incluyendo el analizador de masas del componente central, los anteriores son los seis sistemas que componen el espectrómetro de masas. También discutiremos la estructura, uso y mantenimiento de cada parte más adelante.

Un espectrómetro de masas equipado con estos seis componentes se puede representar mediante el siguiente diagrama esquemático. Normalmente, el analizador de masas y la bomba de turbina de alto vacío están alojados en una caja grande. Este módulo se llama unidad principal. La bomba de bajo vacío (bomba de aceite) se colocará fuera de la unidad principal. Debido a que esta parte generará mucha vibración, ruido y calor, debe colocarse por separado para evitar que la vibración afecte la unidad. espectrómetro de masas. Habrá una fuente de iones delante del espectrómetro de masas y una salida de gases de escape en el lateral. Los gases de escape generados por el espectrómetro de masas y la bomba saldrán al exterior a través de este tubo de escape. En particular, los gases de escape de las bombas suelen ser cancerígenos, por lo que los gases de escape son especialmente importantes.

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