La relación entre PCR y LAMP. ¿Son la PCR y LAMP ambas tecnologías de amplificación de genes?
LAMP, loop-mediated isothermal amplification, su nombre en inglés es loop-mediated isothermal amplification, es un nuevo método de amplificación de ácidos nucleicos, que se caracteriza por diseñar 4 cebadores específicos para 6 regiones del gen diana, bajo la acción de la ADN polimerasa de desplazamiento de cadena (ADN polimerasa Bst), la amplificación a temperatura constante a 60--65 ℃ puede lograr una amplificación de ácido nucleico de 10^9 a 10^10 veces en aproximadamente 15-60 minutos
La El principio básico de la tecnología de PCR es similar al proceso de replicación natural del ADN, y su especificidad se basa en cebadores oligonucleotídicos que son complementarios a ambos extremos de la secuencia objetivo. La PCR consta de tres pasos de reacción básicos: desnaturalización-hibridación-extensión: ① Desnaturalización de. ADN molde: después de calentar el ADN molde a aproximadamente 93 °C durante un cierto período de tiempo, el ADN bicatenario del ADN molde o el ADN bicatenario formado mediante amplificación por PCR se disocia y se convierte en una sola hebra para que se puede combinar con el cebador para la siguiente ronda Preparación para la reacción ② Recocido (renaturalización) del ADN molde y los cebadores: después de que el ADN molde se calienta y se desnaturaliza en una sola cadena, la temperatura desciende a aproximadamente 55 °C. el cebador se empareja con la secuencia complementaria de la cadena sencilla del ADN molde; ③ Extensión del cebador: bajo la acción de la TaqDNA polimerasa, el conjugado plantilla-cebador de ADN utiliza dNTP como materia prima de la reacción y la secuencia objetivo como molde. de emparejamiento de bases complementarias y replicación semiconservadora, se sintetiza una nueva copia semiconservadora complementaria a la cadena de ADN molde. Repitiendo los tres procesos de desnaturalización-recocido-extensión, se pueden obtener más "cadenas de replicación semi-retenidas", y esta nueva cadena puede convertirse en la plantilla para el siguiente ciclo. Se necesitan de 2 a 4 minutos para completar cada ciclo. El gen que se va a amplificar se puede amplificar millones de veces en 2 a 3 horas.