Selección de métodos de PCR cognitiva, PCR cuantitativa y PCR digital
La tecnología PCR está en constante evolución, pero nunca ha desaparecido de nuestra vista. Actualmente ha penetrado en todos los niveles de investigación en el campo de la biología molecular. Especialmente en la epidemia global de este año, muestra el poder de la tecnología PCR. Entonces, ¿cómo elegir la PCR tradicional, la PCR cuantitativa de fluorescencia y la PCR digital en la investigación científica?
En primer lugar, debemos dejar claro que todos los fundamentos de la tecnología PCR de tercera generación provienen de los principios básicos de las reacciones PCR y de las tres fases importantes de las reacciones PCR, a saber, fase exponencial, fase lineal. y fase de meseta.
Período exponencial
En la fase exponencial, la cantidad de producto de PCR en cada ciclo aumenta aproximadamente 1 veces (asumiendo que la eficiencia de la reacción es del 100%), y la reacción de amplificación en este La etapa tiene una especificidad y precisión muy altas.
Periodo lineal (alta variabilidad)
A medida que se consumen los componentes del sistema de reacción de PCR, uno o más de los componentes limita la reacción, provocando que los productos de la PCR se ralenticen. ya no se duplica durante el ciclo.
Fase de plataforma
La reacción se detiene y no se producen más productos. Debido a que la cinética de reacción es diferente para cada muestra, cada reacción entrará en una meseta en un momento diferente, y estas diferencias se pueden observar durante la meseta.
PCR tradicional
La PCR tradicional analiza el producto final de la PCR mediante electroforesis en gel de agarosa (Figura 2), pero su limitación es que solo puede realizar análisis cualitativos. En la Figura 3, los tres pocillos de reacción contienen la misma cantidad de plantilla de ADN, pero las señales de fluorescencia generadas después de alcanzar la fase de meseta son diferentes, lo que indica que las cantidades de productos de amplificación son diferentes (debido a cambios en la cinética de reacción). Esto también muestra que los resultados de las mediciones del ciclo de la plataforma de PCR tradicional son inconsistentes y que la cantidad de ADN producida puede no reflejar la situación inicial y, por lo tanto, no se puede cuantificar.
PCR cuantitativa en tiempo real
También en la Figura 3, se encuentra que las curvas de amplificación de los tres pocillos de reacción son completamente consistentes durante el período exponencial, lo que indica que la detección será más preciso durante el período exponencial, y se puede lograr una cuantificación más precisa. La línea de umbral es el valor de intensidad de fluorescencia cuando la intensidad de fluorescencia del producto amplificado excede el fondo. El número de ciclos después de que la muestra alcanza este valor de intensidad de fluorescencia se denomina valor Cq. Al comparar los valores de Cq de una muestra de concentración desconocida con una serie de estándares, se puede determinar con precisión la cantidad de ADN molde en una reacción desconocida.
PCR digital
La PCR digital distribuye aleatoriamente la muestra de ADN en unidades de reacción independientes, y cada unidad de reacción contiene o no 1 o más copias de la molécula objetivo. Después de amplificar en paralelo todas las unidades de reacción independientes, se detecta y analiza estadísticamente la señal de fluorescencia negativa o positiva de cada unidad de reacción, lo que permite calcular el número de copias de la muestra original sin referencia a un control estándar o endógeno o a una curva estándar.
Selección de PCR tradicional, PCR cuantitativa de fluorescencia y PCR digital
Deep Blue Cloud Biotechnology te proporciona el sistema de PCR cuantitativa de fluorescencia de 3/6 canales de CIELO de Estados Unidos y Gama completa del sistema de PCR digital con chip de gotitas francés Stilla Naica automático de 3 colores/6 colores.
¿Azul cielo? ¿Cielo? Sistema de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real
Proviene de Azure Biosystems en los Estados Unidos y le proporciona el canal Azure Cielo-3 y el canal Azure Cielo-6, que se pueden configurar de manera flexible según los requisitos experimentales. Este producto utiliza LED de alta energía como sistema de fuente de luz, lo que puede garantizar una alta intensidad de la fuente de luz y una buena consistencia de la fuente de luz como sistema de control de temperatura, el módulo de temperatura Peltier de alta calidad tiene velocidades de calentamiento y enfriamiento rápidas y puede configurar un; el gradiente de temperatura de 12 columnas con un alcance de 30 ℃; se utiliza una excelente fotografía CMOS + transmisión de señal de fibra óptica como sistema de detección. La sensibilidad de detección de CMOS es alta, la velocidad de transmisión de fibra óptica es rápida y no hay pérdida de luz ni interferencias. ¿Cielo azul cielo? El sistema de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real puede proporcionar alta precisión, sensibilidad y confiabilidad de resultados experimentales para su investigación científica.
¿Naika? Sistema de PCR digital con chip de gotas
La plataforma de PCR digital de la francesa Stilla Technologies Naica es una herramienta técnica para lograr una cuantificación absoluta de alta sensibilidad de ADN/ARN. La operación de pipeteo en un solo paso puede generar automáticamente gotas en mosaico de una sola capa, y las plantillas de una sola molécula de múltiples genes pueden amplificar la misma solución de reacción. A través de la detección de canales de fluorescencia de tres o seis colores, el control de calidad automático puede identificar gotitas positivas y negativas efectivas en fluorescencia multicolor, logrando así una cuantificación absoluta de alta precisión de ADN/ARN. También proporciona datos originales, trazabilidad de una sola gota y otras funciones para garantizar la autenticidad y confiabilidad de los datos.
Referencias:
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