Principios del cultivo celular|Tecnología de criopreservación celular
2. En la mayoría de las líneas celulares, las células cambiarán con el envejecimiento y la evolución, lo que dará como resultado una "deriva cultural" del fenotipo y el genotipo. Durante el proceso de criopreservación, el funcionamiento adecuado y las condiciones de criopreservación adecuadas pueden reducir el cambio o la pérdida de las características celulares y desempeñar un papel en la preservación celular. Por lo tanto, una criopreservación correcta y exitosa juega un papel muy importante en la conservación de las células a largo plazo.
1. Cuando la temperatura es tan baja como -70°C, todas las actividades enzimáticas y metabólicas en las células se detienen, logrando así el propósito de conservación a largo plazo.
2. A medida que la temperatura disminuye, el agua dentro y fuera de las células se cristalizará y los cristales de hielo formados dañarán la membrana celular y los orgánulos, provocando la muerte celular, especialmente a temperaturas de 0 a -20 °C. etapa, los cristales de hielo tienen forma de aguja, lo que provoca daño celular. Cuando las células se congelan directamente sin ningún agente protector, el agua de las células y el ambiente externo formarán cristales de hielo, provocando daños mecánicos, aumento de electrolitos, cambios en la presión osmótica, deshidratación, cambios de pH, desnaturalización de proteínas, etc. y puede provocar la muerte celular.
3. Los anticongelantes más utilizados son el glicerol o el dimetilsulfóxido (DMSO). El DMSO puede penetrar rápidamente la membrana celular e ingresar a la célula, reducir el punto de congelación, retrasar el proceso de congelación, aumentar la permeabilidad de la membrana celular, aumentar la concentración de iones intracelulares y reducir la formación de cristales de hielo intracelulares, logrando así el propósito de protegiendo las células.
1.El DMSO se utiliza generalmente como agente protector en la criopreservación celular. En la criopreservación celular, la concentración final de DMSO es generalmente de 5 a 15. La concentración específica de DMSO en la solución de criopreservación celular se puede encontrar en la ATCC.
2. Para células particularmente sensibles, es necesario probar la solución de congelación adecuada durante el proceso de criopreservación. Por ejemplo, al congelar neuronas, se debe seleccionar una solución de criopreservación sin suero para evitar la diferenciación después de la recuperación.
? ¿Mantenimiento de la morfología y actividad metabólica en líneas celulares finitas
? ¿Preservación de células preciosas
? ¿Preparación de estándares de líneas celulares
? Criopreservación de células madre de sangre de cordón umbilical y células NK
1. Las células utilizadas para la criopreservación generalmente se seleccionan en la fase de crecimiento logarítmico, cuando la confluencia es de aproximadamente 90. En este momento, las células están creciendo bien y la cantidad de células es grande. Cambie el medio 24 horas antes de recolectar las células.
2. Pruebe el cultivo en busca de contaminantes microbianos, especialmente micoplasma, para asegurarse de que las células estén libres de cualquier contaminación. Durante el proceso de recolección de células, las operaciones experimentales deben ser lo más suaves posible para evitar daños celulares.
1. El control óptimo de la tasa de congelación celular es permitir que las células tengan tiempo suficiente para deshidratarse sin ser dañadas por una deshidratación excesiva. Para la mayoría de las células, es apropiada una caída de 65.438 ± 0 a 3°C por minuto.
2. Método de enfriamiento gradual: 4 ℃ -30 min, 20 ℃ -2 h, -80 ℃ refrigerador durante la noche. Al día siguiente, transfiera el tubo de criopreservación a un tanque de nitrógeno líquido para su almacenamiento a largo plazo.
3. Caja de enfriamiento del programa celular: Coloque los tubos de criopreservación celular preparados en el congelador, manténgalos a -80 °C durante la noche y luego transfiéralo directamente al tanque de nitrógeno líquido.
4.? El proceso de transferencia de la ubicación de almacenamiento debe realizarse rápidamente. Se recomienda almacenar los crioviales en hielo seco a una temperatura constante durante el proceso de transferencia para evitar el impacto de los cambios de temperatura en la viabilidad celular durante el proceso de transferencia.
1. Las células también se pueden almacenar en un frigorífico a -80°C durante varios meses.
2. La temperatura de almacenamiento a largo plazo de las celdas es de -130 ℃ o menos.
3. La temperatura de la capa de gas en el tanque de nitrógeno líquido está entre -140 °C y -180 °C. Lo mejor es almacenar las células en la capa de gas o sumergirlas en nitrógeno líquido. guárdelos si es posible en la capa de gas, esto puede evitar que las células exploten cuando el nitrógeno líquido ingresa al tubo de congelación (pero solo se puede almacenar una pequeña cantidad de nitrógeno líquido en el tanque de nitrógeno líquido y debe agregarse con frecuencia).
¿HyCyte? La solución de criopreservación es una solución de criopreservación celular de "largo plazo" lista para usar, sin suero y que no requiere enfriamiento programado. La fórmula de este producto se ha utilizado durante más de 15 años. Las materias primas se importan de Japón y la calidad del almacenamiento congelado es consistente con la de los productos japoneses.
? Seguro: Sin suero, sin ingredientes de animales exóticos.
? Amplio espectro: Adecuado para muchos tipos de células.
? Eficiente: ¿las células mantienen una alta actividad y proliferan rápidamente después de la recuperación? Capacidad, ¿no afecta la función celular
? Conveniente: Listo para usar, sin preparación adicional, caja de enfriamiento programable y necesidad de dilución.
Protector de membrana celular: puede formar instantáneamente una película protectora fuera de la membrana celular para proteger las células del daño causado por los cristales de hielo extracelulares.
Agente protector osmótico: puede penetrar rápidamente en las células para evitar la producción de grandes cantidades de cristales de hielo dentro de las células, al tiempo que protege los orgánulos celulares y reduce el daño a los orgánulos celulares a bajas temperaturas.
Estabilizador de sedimentación celular: puede equilibrar la velocidad de sedimentación de las células y evitar que las células se agreguen durante la criopreservación.