¿Qué es un cuerpo extracelular?
Las vesículas extracelulares (EV para abreviar) son diversas estructuras de vesículas con estructuras de membrana liberadas por las células. Los diámetros de estas vesículas pueden variar desde 30 y 40 nm hasta 8 y 9 um. Existen diferentes subgrupos de vesículas extracelulares y los exosomas son actualmente el subgrupo más popular.
Sin embargo, debido a que actualmente es difícil purificar un subconjunto muy puro de exosomas, la gente suele purificar vesículas con un diámetro inferior a 200 nm, por lo que cada vez más gente empieza a llamarlo sEV (pequeños exosomas extracelulares). . vesículas). Por razones de rigor, hoy en día también llamamos a estas vesículas de membrana vesículas extracelulares. A menos que se indique lo contrario en el presente documento, las vesículas extracelulares se refieren principalmente a exosomas y microvesículas.
El contenido principal de hoy incluye la importancia de la investigación de las vesículas extracelulares, la clasificación de las vesículas extracelulares, los componentes de las vesículas extracelulares, la preparación del sobrenadante del cultivo celular, la preservación de las vesículas extracelulares y los requisitos experimentales extracelulares para la identificación de vesículas. Todo el contenido hace referencia a comentarios publicados hasta el momento y no fue inventado por Zhang. Así que nuevos amigos, siéntete libre de estudiar.
La importancia de las vesículas extracelulares en la investigación
En la actualidad, la función de las vesículas extracelulares no se ha dilucidado completamente. Se ha informado que modulan las interacciones huésped-patógeno, participan en los procesos patológicos de enfermedades infecciosas e inflamatorias, enfermedades neurológicas y cáncer, y también desempeñan un papel importante en la mediación de la comunicación intercelular durante los procesos fisiológicos normales. También se ha informado que las vesículas extracelulares desempeñan un papel importante en el desarrollo. Las vesículas extracelulares también tienen grandes perspectivas de aplicación en la medicina clínica, principalmente porque contienen ricos biomarcadores y pueden usarse para monitorear el estado clínico, la respuesta al tratamiento, la progresión de la enfermedad, etc. Al mismo tiempo, dado que tienen la función de administrar biomoléculas, todavía tienen el potencial de convertirse en vehículos de administración de fármacos clínicos.
Clasificación de vesículas extracelulares
Vesículas extracelulares: término acuñado por la Sociedad Internacional de Vesículas Extracelulares (ISEV). Las vesículas se pueden clasificar según sus vías biosintéticas o de liberación: los exosomas tienen entre 30 y 150 nm de diámetro, se originan por endocitosis y tienen una densidad de aproximadamente 1,11. Las micropartículas/microvesículas se liberan directamente desde la membrana plasmática, con un diámetro de aproximadamente 100-1000 nm; los cuerpos apoptóticos/vesículas de filtración, con un diámetro de aproximadamente 50 nm-2 μm, se producen por apoptosis. Las vesículas tumorales tienen aproximadamente entre 1 y 10 µm de diámetro y son liberadas por las células tumorales. y varios otros subgrupos de vehículos eléctricos. Debido a las diferencias en los tamaños de los diferentes subgrupos de EV y las biomoléculas que contienen, varios grupos han comenzado a caracterizar la composición de los subgrupos de EV. Artículos recientes afirman que las vesículas extracelulares se clasifican con éxito en subgrupos según el análisis proteómico general de la superficie o los perfiles transcripcionales de poblaciones de vehículos eléctricos individuales. Actualmente, diferentes subpoblaciones de vesículas extracelulares se pueden separar aproximadamente mediante diversos medios, como centrifugación diferencial, filtración, inmunoafinidad, cromatografía, clasificación de células de flujo, centrifugación en gradiente de densidad, etc. Sin embargo, estos métodos no pueden purificar completamente subpoblaciones específicas y las subpoblaciones aisladas a menudo se enriquecen con otras subpoblaciones de vesículas extracelulares.
Componentes contenidos en las vesículas extracelulares
Los componentes de las vesículas extracelulares no son aleatorios, y cada vesícula extracelular lleva información molecular específica. De hecho, estas vesículas extracelulares de tamaño nanométrico pueden transportar moléculas bioactivas como proteínas, lípidos, ácidos nucleicos y azúcares para transmitir señales entre las células. La composición molecular única de su envoltorio determina la señal extracelular que se transmitirá al tipo de célula receptora. . Existe un complejo sistema de clasificación que determina qué moléculas pueden ingresar a las vesículas extracelulares.
Preparación del sobrenadante de cultivo celular
Actualmente existen dos estrategias para preparar el sobrenadante de cultivo celular para la extracción de vesículas extracelulares. Las células se cultivaron en medio de suero bovino fetal (FBS) sin vesículas extracelulares y las células (células privadas de suero) se cultivaron en medio libre de FBS. Sin embargo, algunos artículos actuales de alto nivel suelen adoptar el primer método. Además, algunos artículos han comenzado a centrarse en el impacto del ARN libre en el suero fetal bovino que elimina las vesículas extracelulares en los resultados experimentales, pero aún no se comprende. Si es necesario guardar el sobrenadante del cultivo antes de usarlo para el aislamiento de vesículas extracelulares, las células muertas y los restos celulares deben eliminarse del sistema con anticipación.
Conservación de vesículas extracelulares
l? Rincz et al. almacenaron vesículas extracelulares de neutrófilos en diferentes condiciones y luego analizaron las propiedades de estas vesículas. Descubrieron que, aunque no hubo cambios significativos en el número y la forma de las vesículas en las muestras de vesículas extracelulares, incluso las vesículas extracelulares almacenadas a -20 o -80 grados Celsius habían aumentado significativamente la eversión de fosfatidilserina.
Pero también encontraron que las vesículas extracelulares derivadas de la orina no presentaban estos cambios. Kalra et al. aislaron vesículas extracelulares de células de cáncer colorrectal, las mantuvieron en diferentes condiciones durante un cierto período de tiempo y luego las tiñeron con PKH67 para rastrear la absorción de vesículas extracelulares. Se descubrió que las células aún podían absorber estas vesículas. Tal como están las cosas, los estudiosos aún no han llegado a un consenso sobre si las condiciones de almacenamiento afectan a las vesículas extracelulares. Por lo tanto, se recomienda aislar las vesículas extracelulares y utilizarlas para experimentos lo antes posible y minimizar el proceso de almacenamiento.
Identificación y requisitos experimentales de vesículas extracelulares
Según las directrices publicadas por la Sociedad Internacional de Vesículas Extracelulares (MISEV) en 2014, se requiere que WB identifique la presencia de vesículas extracelulares en la muestra.Este método utiliza la proteína marcadora de las vesículas, observa las características morfológicas de las vesículas extracelulares en la muestra mediante microscopía electrónica y analiza las características de la población (concentración de partículas, distribución de diámetro, etc.) de las vesículas extracelulares.
Eso es todo por hoy. Como nuevo campo de la investigación biológica, el campo de las vesículas extracelulares ha atraído cada vez más atención por parte de académicos y empresas biológicas, y han aparecido cada vez más informes de investigación. Sin embargo, también debemos ser conscientes de que la tecnología de investigación en esta área aún no es perfecta, la comprensión de las vesículas extracelulares aún es insuficiente, la investigación sobre las vesículas extracelulares aún está en sus inicios y todavía queda un largo camino por recorrer. .