¿Por qué la sangre elimina el rpmi en un cultivo celular?
El cultivo celular es el experimento más común y básico en el laboratorio, pero no es el más sencillo. No subestimes el cultivo celular, aquí hay un gran problema. A veces, el estado de las células no es bueno y es imposible realizar experimentos como la transfección y la detección de fármacos. Hay muchos factores que afectan el cultivo celular. Hablemos primero del medio de cultivo y del suero.
◆ MEM está desarrollado a partir del medio básico de Eagle (BME), en el que se ha aumentado la gama y concentración de ingredientes.
◆El medio BEM modificado (DMEM) está diseñado para fibroblastos de ratón y ahora se utiliza habitualmente para cultivar células adherentes. DMEM tiene el doble de concentración de aminoácidos y cuatro veces la concentración de vitaminas de MEM. La doble concentración de HCO3- y CO2 actúa como un mejor amortiguador. En la fórmula original, el contenido de glucosa era de 1000 mg/L. Posteriormente, para el crecimiento de ciertas células, el contenido de glucosa se ajustó a 4500 mg/L. Esto es lo que la gente suele llamar bajo y alto en azúcar.
◆ aMEM contiene aminoácidos, vitaminas, nucleósidos y ácidos grasos adicionales y puede utilizarse en una amplia gama de tipos de células, incluidas células con requisitos nutricionales estrictos.
Ham's F12 está diseñado para clonar células CHO en bajas concentraciones séricas y ahora se usa ampliamente para el análisis de tasas de formación de colonias y cultivos primarios. F12 también se puede mezclar con DMEM en volúmenes iguales para obtener productos con alta concentración y diversos ingredientes. Este medio se ha utilizado en muchos cultivos primarios y líneas celulares que son más difíciles de cultivar.
◆ El medio RPMI 1640 está especialmente diseñado para el cultivo de linfocitos y se ha utilizado ampliamente en cultivos de células en suspensión.
Prepara varios medios de cultivo y luego dedica unas dos semanas a realizar un experimento sencillo de crecimiento celular para seleccionar el más adecuado.
En el pasado, la mayoría de los laboratorios utilizaban medios de cultivo en polvo seco, pero el proceso de preparación era más complicado. Pueden ocurrir algunos errores de concentración durante los procesos de disolución, ajuste de pH y filtración, y en la calidad del agua en algunos laboratorios. También fue inconsistente, por lo que los efectos del cultivo variarán.
Selección del suero:
El suero que contiene factores de crecimiento puede promover la proliferación celular, y el suero que contiene factores de adhesión puede promover la adhesión celular y también tiene actividad antitripsina. El suero también es fuente de minerales, lípidos y hormonas. Los sueros más utilizados son el suero de ternera, el suero de ternera recién nacido, el suero de ternera fetal y el suero de caballo. El suero bovino se clasifica según el momento de la extracción de sangre. Cuanto antes sea el momento de la extracción de sangre, más ricos serán los nutrientes y menos anticuerpos, por lo que el suero fetal bovino es adecuado para líneas celulares exigentes y cultivos de clones.
Las diferencias entre los lotes de suero son inevitables y se originan en diferentes métodos de preparación y esterilización, diferencias de edad de los animales y condiciones de almacenamiento del suero, que están estrechamente relacionados con la fuente de los animales de extracción de sangre. Diferentes pastos, diferentes climas y otros factores ambientales pueden afectar la calidad del suero. Entonces, si eliges un suero, intenta usarlo el mayor tiempo posible. Cuando sea necesario reemplazarlo, debe ser lo más similar posible al lote original de suero. Muchas empresas ofrecen ahora reservas de suero. Una vez seleccionado un determinado lote de suero, lo mejor es reservar suficiente para un año para evitar muchos problemas.
El suero es un componente indispensable en el cultivo celular, pero el suero varía mucho de un lote a otro. Al reemplazar el suero, se requieren pruebas exhaustivas para garantizar que el suero de reemplazo sea similar al suero original. La disponibilidad de suero también es un factor a considerar.
El medio sin suero, normalmente denominado SFM, como su nombre indica, significa que no se requiere suero para el cultivo celular, pero en algunas aplicaciones se pueden añadir factores de crecimiento o citocinas. Agregar los componentes principales del suero, como factores de adhesión, factores de crecimiento, nutrientes esenciales, hormonas, etc., al medio sin suero puede reducir los factores adversos causados por el suero anterior y hacer que las condiciones del cultivo celular sean más estables. Pero no es perfecto y las condiciones para la transición de un cultivo que contiene suero a un cultivo sin suero no son tan sencillas como se imagina. Las células en diferentes etapas de diferenciación y desarrollo (por ejemplo, en comparación con las células precursoras comprometidas) requieren formulaciones diferentes, y la selección de factores de crecimiento y citoquinas es particularmente importante.
Además, cuando se elimina el suero, también se eliminan los efectos protectores y desintoxicantes de algunas proteínas del suero, por lo que se requiere que la pureza de los reactivos y el agua y la limpieza de los instrumentos sean mayores. Además, su precio es mucho más caro que el de los medios de cultivo habituales.
Con tantos tipos, elegir puede ser un dolor de cabeza. Excepto algunos medios formulados públicamente, como MCDB 131 (Sigma) para cultivar células endoteliales, la mayoría de los medios líquidos son propietarios, es decir, sus ingredientes son confidenciales. Entonces sólo podrá buscar en la literatura, encontrar recomendaciones de proveedores y luego utilizar sus propias células para varios subcultivos para seleccionar el medio de cultivo más adecuado. Después de todo, la práctica trae consigo el verdadero conocimiento.