¿Cuáles son los métodos experimentales relacionados con la biología molecular?
Incluye principalmente extracción e identificación de ADN genómico de plantas, animales y microorganismos, extracción e identificación de ARN total de tejidos de mamíferos, extracción e identificación de ADN plasmídico, amplificación por PCR, tecnología de hibridación molecular, endonucleación de restricción, digestión enzimática. , todo el proceso de clonación molecular y construcción de bibliotecas genéticas.
Biología molecular: Estudio de las bases materiales de los fenómenos de la vida a nivel molecular. Estudiar las propiedades físicas y químicas y los cambios de los componentes celulares y la relación entre estas propiedades y cambios y los fenómenos de la vida, como la transmisión de información genética, estructura genética, replicación, transcripción, traducción, regulación de la expresión, funciones fisiológicas de los productos de expresión, células. transducción de señales, etc.
La tecnología más básica de la biología molecular es la expresión y purificación de proteínas. Primero, la secuencia de ADN que codifica la proteína de interés se clona (usando tecnología de PCR y enzimas de restricción) en un plásmido que sirve como vector de expresión. Luego, el plásmido construido se introduce en la célula huésped. La secuencia codificante se expresa mediante el sistema de expresión de la célula huésped impulsado por elementos promotores especiales en el plásmido. Los plásmidos suelen llevar etiquetas de resistencia a los antibióticos para facilitar la detección de plásmidos.
Los plásmidos se pueden insertar en células bacterianas o animales. La introducción de ADN exógeno en las bacterias se denomina transformación y se puede lograr mediante métodos como la electroporación, la microinyección, la absorción positiva y la fusión. La introducción de ADN extraño en células eucariotas, como las células animales, se denomina transfección. Las técnicas de transfección incluyen el método del fosfato cálcico, el método de los liposomas y algunos reactivos de transfección comerciales patentados. El ADN también puede introducirse en las células huésped mediante virus o bacterias patógenas. Cuando esta técnica de transfección viral o patógena se aplica a células, el término es "células transducidas".
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica muy común para replicar el ADN in vitro. En resumen, la tecnología PCR permite copiar el ADN monocatenario millones de veces y también permite modificar las secuencias de ADN copiadas de una forma predeterminada. Por ejemplo, la tecnología de PCR se puede utilizar para introducir sitios de restricción o mutar (cambiar) bases de ADN específicas. La tecnología de PCR también puede obtener fragmentos de ADN específicos de bibliotecas de ADNc o determinar si una biblioteca de ADNc contiene fragmentos de ADN específicos desde otra perspectiva.
La electroforesis en gel es la tecnología más importante en biología molecular. El principio básico es que el ADN, el ARN y las proteínas pueden separarse mediante campos eléctricos. En la electroforesis en gel de agarosa, el gel de agarosa puede separar el ADN y el ARN en función de su tamaño molecular. De manera similar, las proteínas se pueden separar mediante SDS-PAGE. Además, las proteínas también se pueden separar mediante electroforesis por enfoque isoeléctrico debido a sus diferentes cargas.