¿Cómo producir industrialmente anticuerpos humanizados?

En la teoría central de WB: reacción específica entre antígeno y anticuerpo, el autor mencionó que el principio central de WB es la reacción específica entre antígeno y anticuerpo, que involucra el factor más crítico en WB: los anticuerpos, especialmente los anticuerpos primarios. Los anticuerpos primarios y secundarios apropiados determinan el éxito del experimento WB y la calidad de los resultados experimentales (banda WB y fondo). Sabemos que los anticuerpos se pueden dividir en anticuerpos monoclonales (MAb) y anticuerpos policlonales (pAb). Los anticuerpos monoclonales sólo pueden unirse a un único antígeno específico, mientras que los anticuerpos policlonales pueden unirse a más de un antígeno. Por tanto, los anticuerpos monoclonales son significativamente más específicos que los anticuerpos policlonales. En los experimentos de WB, se utilizan anticuerpos monoclonales para detectar proteínas objetivo, la mayoría de ellos muestran una única banda clara y los resultados experimentales son buenos. Sin embargo, cuando se utilizan anticuerpos policlonales, pueden aparecer bandas múltiples o poco claras, lo que da como resultado resultados experimentales de mala calidad.

Aquí hablaré brevemente sobre la historia y la tecnología de producción y preparación de anticuerpos, que determina la calidad y el tipo de producción de anticuerpos. El proceso de producción y preparación de anticuerpos se puede dividir en tres etapas: métodos tradicionales para inmunizar animales para obtener anticuerpos, tecnología de hibridoma para preparar anticuerpos y tecnología de ingeniería genética para preparar anticuerpos.

1. El método tradicional de preparación de anticuerpos mediante la inmunización de animales: inyectar inmunógenos (antígenos) obtenidos por diversos métodos en animales (como ratas, ratones, conejos) para estimular la diferenciación de células B en los animales maduros, producir. y secretar anticuerpos, luego recoger el suero animal, separarlo y purificarlo para obtener anticuerpos terminados. Debido a la preparación temprana de inmunógenos, la tecnología de purificación y las limitaciones de costos, la mayoría de los anticuerpos preparados mediante los primeros métodos tradicionales eran anticuerpos policlonales. Este método es relativamente económico, pero requiere el uso de una gran cantidad de animales, lo que puede conducir fácilmente a la "crueldad hacia los animales". En 2016, el gigante de los anticuerpos Santa Cruz fue multado por crueldad animal y prohibió la venta de anticuerpos policlonales.

2. Preparación de anticuerpos mediante tecnología de hibridoma: En 1975, el científico británico Milstein y el científico francés Kohler fusionaron linfocitos B derivados de ratones con células tumorales para formar células de hibridoma, que no sólo tienen anticuerpos de células B. las funciones de producción y secreción, y también tiene la función de proliferación ilimitada de células tumorales. Técnicamente, el inmunógeno se inyecta primero en el animal mediante inyección subcutánea, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, etc. para estimular al animal a producir células B específicas, luego se sacrifica el animal y se recolectan las células B del bazo. Las células de hibridoma se preparan mediante fusión de células B y células tumorales in vitro, y las células de hibridoma se seleccionan y cultivan in vitro. Los anticuerpos se pueden obtener amplificando células de hibridoma in vitro y recogiendo y purificando el sobrenadante del medio de cultivo, o inyectando células de hibridoma en animales (vasos sanguíneos, cavidad peritoneal, etc.). ) y la recogida y purificación de fluidos corporales animales (ascitis, suero, etc.). ).La tecnología de hibridoma dio origen a la primera generación de anticuerpos monoclonales, que son altamente específicos y fáciles de producir en masa.

3. Tecnología de ingeniería genética para preparar anticuerpos: la tecnología genética funcional permite a los investigadores recombinarse in vitro: insertar cualquier fragmento de gen en un vector de expresión específico (plásmido) y luego transferir el plásmido editado a una amplificación in vitro y Los cultivos se realizan en cepas celulares y líneas celulares específicas para obtener la transcripción y traducción in vitro del fragmento génico para preparar anticuerpos. La tecnología de ingeniería genética permite una producción más rápida de anticuerpos y hace que los anticuerpos humanizados sean más convenientes, convirtiéndose así en fármacos de anticuerpos para el tratamiento clínico. Los anticuerpos producidos por esta tecnología son anticuerpos uniformes con alta especificidad y fáciles de producir a escala industrial. En los últimos años, los anticuerpos monoclonales recombinantes producidos por Abcam Company son anticuerpos producidos para este tipo de tecnología, con alta especificidad y fuerte afinidad.