Preparación y caracterización de dispersión sólida de isoflavonas de soja.
En este estudio, se utilizó un experimento ortogonal para evaluar la prescripción de tabletas de isoflavonas de soja y se utilizó cromatografía líquida de alto rendimiento para determinar el contenido de los principales ingredientes activos daidzeína y genisteína.
1 Instrumentos y materiales
1.1 Instrumentos Sistema de fase líquida de alto rendimiento Dionex, estación de trabajo de datos de cromatografía Chlomelon; máquina de tabletas eléctrica de escritorio de punzonado único continuo YP-1.5 producida por Nantong Huayu Pharmaceutical Machinery Co. ., Ltd.; aparato de disolución inteligente ZRS-8G producido por Tianjin Tianda Tianfa Technology Co., Ltd.
1.2 Materiales sustancias de referencia de daidzeína y genisteína, compradas a la empresa sigma, con un contenido superior al 99%; extracto de isoflavonas de soja, pureza de isoflavonas >90 %, adquirido de Beijing Huaqing Meiheng Company; lauril sulfato de sodio (producido por Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.); lactosa (producida por Huzhou Food Chemical Company); fábrica de excipientes).
2 Métodos y resultados
2.1 Detección de prescripción de tabletas de isoflavonas de soja
2.1.1 Fórmula de detección de prueba ortogonal Con base en la prueba previa, se utilizó lactosa como Relleno, lechada de almidón al 10 % como aglutinante, estearato de magnesio como lubricante, lauril sulfato de sodio como desintegrante. Seleccione 1000 tabletas, la cantidad de lactosa, la cantidad de suspensión de almidón al 10 %, la cantidad de estearato de magnesio y la cantidad de lauril sulfato de sodio, y tome tres niveles para cada factor. Utilice la tabla ortogonal L9 (34) para probar y. optimizar la prescripción. Tabla 1 Tabla de grados de factores
2.1.2 Proceso de preparación: Las materias primas y auxiliares se tamizan con malla 100 y se reservan. Pese las cantidades prescritas de isoflavonas de soja, lactosa y lauril sulfato de sodio y mezcle uniformemente. El material blando se elabora con una cantidad adecuada de adhesivo, se pasa a través de un tamiz de nailon de 16 mallas, las partículas húmedas se secan a 60°C durante 60 minutos, las partículas secas se pasan a través de un tamiz de nailon de 14 mallas, las partículas se Se clasifica y se mezcla uniformemente, y luego se agrega estearato de magnesio. Se prensan comprimidos con un diámetro de 8 mm y un peso de 500 mg, y se controla la dureza a (3,5 ± 0,5) kg/mm2.
2.1.3 Resultados experimentales y análisis Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 2. Tabla 2 Resultados de la prueba ortogonal y la detección de prescripción
La fórmula óptima es A3B3C2D3, es decir, por kilogramo de tabletas de isoflavonas de soja, la dosis de lactosa es de 200 g, la dosis de suspensión de almidón al 10% es de 20 ml, y la dosis de dodecilsulfato La dosis de sodio es de 12 gy la dosis de estearato de magnesio es de 10 g. Entre los cuatro factores, el factor A es la dosis de lactosa, seguida de la dosis de laurilsulfato de sodio, estearato de magnesio y. suspensión de almidón, es decir, cada factor El orden de influencia es A>C>D>B.
2.2 Determinación del contenido
2.2.1 Columna cromatográfica: columna Diamonsil TM C18 (4,6 mm × 200 mm , 5 micrones); fase móvil: la proporción de metanol a ácido fosfórico al 0,1% es 42:58; temperatura de la columna: 30°C; caudal: 1,0 ml/min; longitud de onda de detección: 254 nm;
2.2.2 Preparación de la solución de referencia Pesar con precisión 65438±05 mg de daidzeína y 20 mg de genisteína respectivamente, colocarlos en el mismo matraz aforado y ajustar el volumen a 50 ml con etanol absoluto, es decir obtener. solución de referencia.
2.2.3 Preparación de la solución de prueba: tomar 3 tabletas de isoflavonas de soja, triturarlas y pesar con precisión aproximadamente 0,6 g en una botella medidora de 100 ml, agregar 80 ml de metanol, someter a ultrasonido durante 30 minutos y enfriar. Posteriormente, diluir a volumen con metanol, agitar bien, filtrar con una membrana microporosa de 0,45 micras y tomar el filtrado continuo como solución de prueba.
2.2.4 Investigación de la relación lineal: Inyectar 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 μl de solución de control de daidzeína y genisteína en el cromatógrafo líquido de alta resolución (c). la abscisa y el área del pico cromatográfico (a) es la ordenada. Al mismo tiempo, la ecuación de regresión Y=55,378X-10,789, r=0,9996. Los resultados mostraron que la concentración de genisteína osciló entre 8,0 y 64,0 μg/ml, y el área del pico tenía una buena relación lineal con la concentración.
Figura 1, gráfico de HPLC de tabletas de isoflavonas de soja
(a) Cromatograma de la sustancia de referencia y (b) cromatograma de tabletas de isoflavonas de soja (1 es daidzeína, 2 es genisteína); /p>
2.2.5 Prueba de precisión: Tome 10 µl de solución de control de daidzeína a 30,0 µg/ml y solución de control de genisteína a 40,0 µg/ml e inyecte 6 veces consecutivas. Las desviaciones estándar relativas de las áreas máximas de daidzeína y genisteína fueron 0,86% y 0,78%, respectivamente.
2.2.6 En la prueba de estabilidad, se inyectaron 10 μl de la solución de prueba de la misma concentración a las 0, 2, 4, 8, 12 y 24 h respectivamente. Las áreas de los picos de daidzeína y genisteína fueron. Las RSD fueron 1,641 % y 0,836 % respectivamente, lo que indica que la solución de prueba estuvo disponible dentro de las 24 horas. Los cromatogramas de HPLC de la sustancia de control y el producto de prueba se muestran en la Figura 1.
2.2.7 Prueba de repetibilidad: tomar el mismo lote de muestras, preparar 6 soluciones de prueba de acuerdo con el método de 2.2.3, medir con precisión 10 μl e inyectar muestras respectivamente. Las concentraciones de daidzeína y genisteína son. Los RSD son 1,03% y 1,16% respectivamente.
2.2.8 Prueba de tasa de recuperación: tomar 6 muestras con contenido conocido, agregar 1 ml de solución de control de daidzeína a 1,01 mg/ml respectivamente, tomar 6 muestras con contenido conocido, agregar 1,85 mg respectivamente/ml de solución de control de genisteína 1 ml, según 2.2. Después de inyectar 10 μl en secuencia, las tasas de recuperación calculadas de daidzeína y genisteína fueron del 98,3% y 97,1%, respectivamente, y las RSD fueron del 1,45% y 1,19%, respectivamente.
2.2.9 Determinación del contenido del producto terminado: pesar con precisión aproximadamente 0,1 g de tabletas de isoflavonas de soja de diferentes lotes, preparar la solución de prueba de acuerdo con el método 2.3.3 y medir de acuerdo con las condiciones cromatográficas anteriores. Los resultados se muestran en la Tabla 3. Tabla 3 Resultados de la determinación del contenido de los productos terminados
3 Discusión
La fórmula optimizada de las tabletas de isoflavonas de soja es: por kilogramo de tabletas de isoflavonas de soja, la cantidad de lactosa es de 200 g y la La cantidad de suspensión de almidón al 10% es de 20 ml, la dosis de laurilsulfato de sodio es de 12 gy la dosis de estearato de magnesio es de 10 g. Después de la producción ampliada, las condiciones son controlables. Las tabletas extruidas tienen una apariencia suave y uniforme. color, rápida desintegración y buen sabor.
El método HPLC establecido en este artículo para determinar el contenido de daidzeína y genisteína en los gránulos de fórmula es simple de operar, tiene buena reproducibilidad y puede controlar eficazmente la calidad de las tabletas de isoflavonas de soja.
La daidzeína y la genisteína son los principales ingredientes activos de los comprimidos de isoflavonas de soja, que tienen evidentes efectos preventivos y terapéuticos sobre la osteoporosis. Por lo tanto, es razonable y factible utilizar los contenidos de daidzeína y genisteína como indicadores de control de calidad de las tabletas de isoflavonas de soja.