Cómo construir ratones con sobreexpresión del gen hnrnpk

Objetivo: Utilizar el gen de la β-galactasa de Escherichia coli LacZ como gen indicador para establecer ratones transgénicos que contengan sitios loxp en el receptor tirosina quinasa Tyro3 y Axl. Cruzar con ratones Cre con diferentes especificidades tisulares, para obtener ratones transgénicos. que expresan Tyro3 y Axl espaciotemporalmente, sentando las bases para estudiar sus funciones en diversos tejidos. Métodos Se construyeron los plásmidos de los receptores de tirosina quinasa Tyro3 y Axl que contienen sitios loxp y, después de una secuenciación correcta, se colocaron el vector transgénico insertando el Geo-STOP-msAxl. y los genes Geo-STOP-msTyro3 aguas abajo del promotor CAG se inyectaron en los óvulos fertilizados del ratón donante BDF1 mediante el método de inyección, y los óvulos fertilizados se trasplantaron a los ratones receptores de ICR. Después de que nació la camada, se realizó una PCR con doble cebador. Se identificaron los genotipos de ratones de generación F0 y Fn, se usaron RT-PCR y tinción con X-gal para observar el gen LacZ en tejidos de ratón, y se usó WB (Western Blot) para detectar la diferencia en la expresión de la diana. proteína en ratones transgénicos y ratones de tipo salvaje. Resultados Se obtuvieron ratones transgénicos positivos que contenían el gen diana; la presencia del gen LacZ se confirmó en los ratones positivos mediante tinción con X-gal en los ratones con LacZ; gen, y los resultados mostraron que el cerebro, los testículos y el timo de Geo-STOP-msTyro3. Se observaron precipitados azules en el cerebro, el corazón y los riñones de Geo-STOP-msAxl, lo que indica indirectamente los tejidos y órganos en los que se encuentra el gen objetivo. se puede expresar para los ratones transgénicos Geo-STOP-msTyro3, ​​​​Geo-STOP -msAxl y ratones de tipo salvaje doblemente positivos, la prueba WB confirmó que no hay diferencia en la expresión de los genes Tyro3 y Axl, lo que indica que después añadiendo la secuencia stop, el gen Tyro3 sí existe y su expresión está inhibida. Conclusión Ratones transgénicos del receptor de tirosina Geo-STOP-msAxl y Geo -STOP-msTyro3.