Cómo verificar las interacciones entre proteínas, te preocupes

Título: Uso del método FRET para estudiar el dominio de la proteína CENP-E que interactúa con la proteína Mps1

Autor: Liu Zijie, Weng Yaguang, Li Suyan, Shi Qiong, Cai Yan, Liu Bin, Zhang Yanyanchen

Institución: Diagnóstico de laboratorio clínico, Departamento de medicina de laboratorio médico, Universidad Médica de Chongqing, Laboratorio clave del Ministerio de Educación, Laboratorio clave municipal de Chongqing, Chongqing 400016

Publicación nombre: "Chinese Journal of Bioengineering" 2009 Volumen 29, Número 4, Páginas 28-34

Palabras clave Interacción de la proteína CENP-E Mps1 Transferencia de energía por vibración de fluorescencia

Propósito abstracto: explorar el interacción con la proteína Mps1, dominio proteico CENP-E que actúa. Métodos: Los plásmidos recombinantes pEGFP-CENPE2 (aminoácidos 674 a 1085) y pEGFP-CENPE3 (aminoácidos 1200 a 2134) se transfectaron en células de riñón embrionario humano 293 (HEK293) y se utilizó la fluorescencia de blanqueo del receptor. Se utilizó el método (método FRET) para detectar la tasa de transferencia de energía (Ef) entre EGFP-CENPE2, EGFP-CENPE3 y Mps1, y además se utilizó el método de precipitación por inmunofluorescencia para verificar los resultados experimentales de FRET. Resultados: Después de que el plásmido recombinante se transfectó en células HEK293, se observó mediante microscopía de enfoque láser que la proteína de fusión expresada por el plásmido recombinante y Mps1 tenía una localización positiva. Los resultados de la detección de FRET mostraron que EGFP-CENPE3 y

; La tasa de transferencia de energía entre Mps1 es [(12,63±0,48)%, n=30], la tasa de transferencia de energía entre pEGFP-CENPE2 y Mps1

[(3,07±0,21) %, n=30], En comparación con el grupo de control [(2,96 ± 0,27) %, n = 30], la diferencia en la tasa de transferencia de energía entre pEGFP-CENPE3 y Mps1 es significativa (p <0,05). Los resultados del experimento de inmunoinmunoprecipitación mostraron que existe una interacción entre EGFP- Proteína CENPE3 y Mps1. Conclusión: La tecnología FRET y los experimentos de inmunoprecipitación demostraron que existe una interacción entre EGFP-CENPE3 y Mps1.