¡Urgente! Problema de conexión del extremo plano

Para la ligadura de extremos romos, se debe utilizar una gran cantidad de fragmentos diana para competir por la autoligación del vector. Generalmente, debe asegurarse de que la proporción molar de su fragmento con respecto a su vector sea superior a 8:1 para lograr una mayor eficiencia de ligadura.

En un sistema de 10 μl, la ligasa T4 generalmente usa 0,5 μl. Luego simplemente agrega el fragmento y el vector en una proporción molar de 10:1 y completa el volumen con agua.

Además, la razón principal del fallo de la conexión del extremo plano es que la autoconexión del transportista es muy grave. El portador se puede desfosforilar tratándolo con fosfatasa, es decir, eliminando el grupo fosfato al final del portador. Esto puede reducir en gran medida la probabilidad de autoligación del portador y aumentar la tasa de éxito de la ligadura.