Opciones generales para el cultivo de tejidos de crisantemo
2. El cultivo de hojas de crisantemo tiene la ventaja de ser fácil de obtener y no afecta la floración de la planta madre, especialmente cuando la planta madre es escasa. El material de inoculación se selecciona de los brotes recién brotados. Las medidas de esterilización son las mismas que las de las secciones del tallo, excepto la esterilización de la superficie sumergiéndolas en alcohol al 70% durante 30 a 60 segundos. Después de la esterilización, tome la punta de la hoja o la parte media de la hoja con la nervadura central (no se debe usar la parte cerca de la base de la hoja), córtela en un cuadrado de aproximadamente 1 cm2 y colóquela boca arriba sobre la superficie del cultivo. medio y presiónelo ligeramente con unas pinzas de inoculación. Para la primera generación de cultivo, se realizó un tratamiento en oscuridad durante las primeras dos semanas y luego se cambió a un cultivo con luz normal. 3-5 días después de la inoculación, la parte media del explante se abultó y los bordes se engrosaron. El callo aparece después de 1-2 semanas, y la tasa de inducción del callo alcanza más del 90% a los 20 días, y las yemas o yemas comienzan a diferenciarse. Al mes, el tratamiento óptimo de explantes (MS+6-Ba3mg/L diez NAA2 mg/L) alcanzó 25,8%, y el coeficiente de diferenciación de yemas (basado en explantes con yemas diferenciadas) fue de 2,8. Dos meses después, estos últimos son de 87,5. % y 8,14 respectivamente. Las plántulas miden 2-3 cm de altura y se pueden utilizar.
El enraizamiento y cultivo de crisantemos es muy sencillo. Las raíces serán visibles después de 1 semana en medio de enraizamiento. La tasa de enraizamiento puede alcanzar el 96,4% después de 12 días y el número promedio de raíces por plántula es más de 4. El medio de enraizamiento es 1/4 MS+NAA 0,1 mg/L (1/4: el contenido de sales inorgánicas y macroelementos es 1/4 de la dosis estándar de MS).
La tasa de supervivencia trasplantada de plántulas de crisantemo en probeta es alta, generalmente alcanza más del 84%, la tasa de supervivencia trasplantada de plántulas sin raíces (después de enraizar y cultivar) también puede alcanzar alrededor del 67%, pero las delgadas; las plántulas enterradas en el suelo sobrevivirán. El sustrato de trasplante puede ser tierra de jardín común y la capa superior del suelo preferiblemente debe estar protegida con malla. Al trasplantar, saque el medio de cultivo en las raíces de las plántulas del tubo de ensayo, entiérrelas y compacte ligeramente la tierra para absorber suficiente agua al mismo tiempo. El semillero se puede cubrir con una película o con vidrio si se trasplanta con brochetas; . Dentro de 1 a 2 semanas después del trasplante, preste atención a la preservación del calor y la hidratación de las hojas (use un rociador de orificio fino y luego destape gradualmente la cubierta de acuerdo con el estado de las plántulas. Cuando las hojas nuevas se estiren, puede hacerlo gradualmente). cambiar a atención de rutina. El periodo de trasplante se realiza generalmente a finales de invierno y principios de primavera, con alta tasa de supervivencia y fácil manejo. Preste atención a la sombra y al frescor al trasplantar en verano.
Las plántulas de probeta de hojas, al igual que las plántulas de probeta de nudos de tallo, mantienen básicamente las principales características ornamentales de las variedades originales, como color, patrón, etc. Sin embargo, durante el experimento se produjeron algunos cambios en el color de las flores individuales. Por ejemplo, en la población de plántulas del cultivo de hojas "Erqiao", la mutación que hizo que los brotes laterales se convirtieran en flores verdes ocurrió en el décimo nodo hacia abajo desde la flor superior, y el patrón genético fue estable.
3. Cultivo de botones florales y pétalos.
Tiene las características de fácil disponibilidad de materiales y alto coeficiente de reproducción. Sin embargo, los principales rasgos ornamentales de estos dos tipos de plántulas de probeta explantadas están gravemente degradados y sólo pueden utilizarse como medio auxiliar para el mejoramiento de nuevas variedades y no deben utilizarse para la propagación clonal rápida. El cultivo de yemas utiliza principalmente yemas laterales, con un tamaño de 1 cm, que en realidad es el receptáculo después de retirar los sépalos y los pétalos no desarrollados utilizan la parte ligeramente interna de la flor recién abierta; El tratamiento de esterilización es básicamente el mismo que el de los nudos del tallo, pero el tratamiento de esterilización de rutina de botones florales y explantes de pétalos se dora fácilmente, por lo que se modifica a alcohol al 70% durante 30 segundos + cloruro de mercurio al 0,1% durante 10 minutos (dos veces ) o hipoclorito de sodio al 5% durante 20 minutos. El medio de cultivo es MS-ba2mg/l-naa0.01mg/l
Al inocular, corte los botones florales en cuartos iguales; corte los pétalos en 0,5-1 cm ~ 2 (los pétalos tubulares miden 0,5 cm de largo; ), inocular sobre la superficie del medio de cultivo desde el frente y compactarlo ligeramente.
Tres días después de la inoculación y cultivo, los explantes comenzaron a hincharse y tornarse verdes. Después de 12 días, la superficie se hincha y comienza a diferenciarse y brotar. Después de 30 días, la diferenciación de las yemas primarias básicamente se detiene. Sin embargo, los efectos del cultivo varían mucho entre variedades: tomando como ejemplo "Mountain Green Ridge", la tasa de diferenciación de explante es del 83% y el coeficiente de diferenciación de yemas es de 20, mientras que la variedad "Cuiyu" es del 14% y 1 respectivamente;
Los explantes de pétalos pueden hincharse y espesarse significativamente después de 3-6 días de cultivo, diferenciarse en tejido calloso después de 10 días y se pueden observar yemas después de 20-30 días de cultivo; sin embargo, el coeficiente de diferenciación de; Las yemas son más bajas que las de las yemas. El efecto de inducción de yemas también mostró diferencias obvias entre los dos. Para variedades que son difíciles de diferenciar en cogollos, la cantidad de hormonas en el medio de cultivo se puede aumentar adecuadamente, como usar un medio con una fórmula de MS+6-Ba3mg/L+NAALMG/L para promover la diferenciación. Además, la inoculación de pétalos después del pretratamiento a baja temperatura puede aumentar en gran medida la proporción de yemas inducidas, y el coeficiente de yemas inducidas también se duplica en comparación con el control. El efecto del cultivo oscuro es más prominente y el coeficiente de inducción de yemas se puede aumentar más de 4 veces.
El fenómeno de variación de las plántulas de pétalos, tomando como ejemplo la variedad tradicional multicolor "Jinbei Dahong", mostró tres tipos de variación en el experimento: ① pétalos amarillos, planos, puntas de flores rojizas en forma de lengua ; en forma de loto, el diámetro de la flor es menor que el de la variedad original. ②El color y el patrón son los mismos que los de la variedad original, pero el ancho de los pétalos aumenta ligeramente y el diámetro de la flor se reduce. (3) La cuchara de la flor en forma de lengua es plana, la parte en forma de cuchara delante de los pétalos es roja y la parte tubular detrás de los pétalos es amarilla. Toda la inflorescencia tiene una estructura multicolor con rojo por fuera y amarillo por dentro, lo que tiene un alto valor ornamental y es un excelente tipo varietal.
Se realizaron dos años de observación en plántulas de cultivo de tejido de pétalos de ocho variedades y cinco colores. Los resultados muestran que: ① En términos de selección de color, es apropiado elegir variedades multicolores como materiales de prueba, y se puede obtener una gama más amplia de variación de color en la población cultivada. Los pétalos de las flores monocromáticas no cambian mucho de color cuando se cultivan. ② Los cambios de forma del pétalo tienden a ensancharse, es decir, la válvula de tubería cambia a una válvula de cuchara y la válvula plana se convierte en una válvula plana ancha. La obtención de nuevas variedades de crisantemos cortados es un método sencillo y eficaz. ③El diámetro general de la flor y el número de pétalos mostraron una variación de regresión, que fue peor que la de la variedad de prueba original. ④La variación es una variación genética estable y no hay separación ni recuperación. Por lo tanto, la aplicación del cultivo de tejidos de pétalos de crisantemo en el mejoramiento implica principalmente la selección de materiales apropiados.