¿Cómo funciona la secuenciación del ADN? ¿Cuál es el principio de la secuenciación del genoma?
La secuenciación de ADN se puede dividir en secuenciación manual y secuenciación automática. La secuenciación manual incluyó la terminación de la cadena didesoxi de Sanger y la degradación química de combinación no polar-Gilbert. De hecho, la secuenciación automatizada se ha convertido en la corriente principal del análisis de secuencias de ADN. La secuenciación automática se desarrolla basándose en el método Sanger.
El principio de secuenciación de ADN debería responder al principio de combinación infinita: degradación química de Gilbert, método de terminación de cadena didesoxi de Sanger y la secuenciación de pirofosforilación ahora desarrollada.
Si el principio de secuenciación más utilizado es la secuenciación automática: se utiliza tecnología de electroforesis capilar en lugar de la electroforesis tradicional en placas de poliacrilamida, y se utiliza el ddNTP patentado de la empresa con tintes fluorescentes de cuatro colores (método de terminador etiquetado), entonces A través de la reacción de secuenciación por PCR con cebador único, el producto de PCR generado es una mezcla de ADN monocatenario con cuatro tintes fluorescentes diferentes en el extremo 3', que difieren en 1 base. De esta manera, se pueden obtener los productos de secuenciación de PCR de los cuatro tintes fluorescentes. electroforetarse en un tubo capilar. Evita la necesidad de secuenciación por PCR con un solo cebador. La movilidad en la electroforesis capilar también es diferente debido a los diferentes tamaños de las moléculas. Un detector de cámara CCD (dispositivo de carga acoplada) en la ventana del detector láser puede detectar moléculas fluorescentes una por una a medida que pasan a través de la ventana de lectura capilar. La fluorescencia excitada se segmenta mediante una rejilla para distinguir diferentes colores de fluorescencia que representan información diferente del sustrato, y las imágenes se sincronizan en una cámara CCD. El software de análisis puede convertir automáticamente diferentes fluorescencias en secuencias de ADN para lograr el propósito de la secuenciación del ADN.
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Los principios de la secuenciación del genoma incluyen la preparación de muestras, la secuenciación a gran escala y el análisis de secuencia.
Ver /teq/454-GS_flx.shtml.