¿Qué es la solución de preservación de exosomas?
1. Selección y precauciones de muestras de exosomas
Diferentes muestras experimentales deben prestar atención a diferentes puntos al recolectarlas. ¿Qué tipo de muestras estás estudiando y qué aspectos necesitan especial atención? Consulte la explicación a continuación:
1. Sobrenadante de células
Elija el sobrenadante de cultivo celular como material experimental para el aislamiento de exosomas. No hay límite de tamaño de muestra como el problema de las muestras de sangre. Es simple y se puede centrifugar directamente. Sin embargo, se debe prestar atención a la contaminación, el tiempo de cultivo, la tasa de muerte celular y el FBS durante el cultivo celular. Como todos los experimentos con células, no se permite la contaminación durante el proceso de cultivo. Sin embargo, algunas células cultivadas portan genomas virales y liberarán partículas de virus durante el proceso de cultivo. Esto depende de si las partículas de virus afectarán los experimentos posteriores.
En general, los exosomas se pueden aislar después de que las células se cultivan durante 24-48 horas. En circunstancias especiales, si se agregan productos químicos especiales al medio de cultivo, se pueden recolectar después de cultivar durante 15 a 60 minutos. Debido a que las células secretan cuerpos después de la muerte celular, la tasa de muerte celular debe controlarse dentro del 5% al estudiar los exosomas. El FBS no tratado contiene grandes cantidades de exosomas, por lo que se debe utilizar FBS libre de exosomas tratado para el cultivo celular.
2. Saliva
La composición de la saliva cambiará con la ubicación y el momento del muestreo, por lo que debe fijarse y cronometrarse como las muestras de sangre. La saliva es secretada principalmente por la glándula sublingual, la glándula submandibular y la glándula parótida, por lo que la composición de la saliva en diferentes lugares es diferente al recolectar, es necesario fijar la ubicación o recolectar toda la saliva. La composición de la saliva variará en diferentes momentos y debe tomarse con regularidad. Otros, como fumar y comer, están prohibidos. En términos generales, se recomienda no comer, incluidas bebidas, ni hacer ejercicio intenso dentro de la hora posterior a la toma de muestra, y recolectar las muestras en un estado de calma. Por último, no te cepilles los dientes.
3. Sangre
En el primer curso de exocrinología, muchos estudiantes hicieron preguntas sobre la elección del suero y el plasma. ¿Cuál deberíamos elegir? Plasma = sangre - células sanguíneas suero = plasma - fibrinógeno - factores de coagulación
Si no puedes notar la diferencia entre los dos, puedes recordarla averiguando la fuente del suero. El suero es el líquido que se recoge tras la coagulación de la sangre, por lo que carece de fibrinógeno, factores de coagulación y una gran cantidad de productos de coagulación. El fibrinógeno se puede convertir en fibrina, que tiene una función de coagulación sanguínea. Las plaquetas secretan una gran cantidad de exosomas durante el proceso de coagulación. Los estudios han encontrado que casi el 50% de los exosomas en el suero provienen de una secreción adicional. Por lo tanto, generalmente se elige plasma para los experimentos. En casos especiales, como en la investigación de enfermedades relacionadas con las plaquetas, el suero es, por supuesto, más adecuado.
Debido a restricciones de muestra, las muestras de sangre generalmente son de 2ml. ¿A qué debo prestar atención al extraer sangre? Una cuestión que a menudo se pasa por alto al estudiar muestras de sangre de exosomas es el tamaño de la aguja. Durante el proceso de extracción de sangre, se generan fuerzas de corte a medida que la sangre fluye a través de la aguja. Si la aguja es demasiado delgada y la fuerza de corte es grande, las células se romperán o las plaquetas serán estimuladas para secretar exosomas, lo que afectará los experimentos posteriores. Hay informes en la literatura de que las agujas de calibre 21 son más adecuadas para la recolección de muestras de sangre para estudios exocrinos. Otros, como el lugar de extracción de sangre, el ciclo fisiológico humano, el ciclo dietético, el ciclo de tiempo (24 h), etc., afectarán a los exosomas de la muestra. Por lo tanto, al realizar el muestreo, trate de hacerlo de forma fija y sincronizada. Por último, es importante tener en cuenta que las muestras deben procesarse dentro de los 30 minutos posteriores a la extracción de sangre porque las células sanguíneas y las plaquetas también secretan exosomas cuando la sangre se extrae en el tubo de extracción.
4. Secreción nasal
El estudio de la mucosidad nasal tiene un valor especial y puede explorar los exosomas terapéuticos. ¿Qué son los exosomas terapéuticos? En el tratamiento de enfermedades cerebrales, los fármacos se pueden inyectar en la cavidad nasal en forma de exosomas, lo que permite que los fármacos eviten la barrera hematoencefálica. La acumulación de moco nasal está relacionada con muchos factores ambientales, como edad, estación del año, sexo, ciudad, antecedentes de alergia, riesgos laborales, etc. No existe un estándar uniforme para recolectar moco nasal, siempre que todas las muestras se tomen de la misma manera.
5. Orina
Además de la influencia del sexo, la edad y la dieta, también hay un punto especial en el muestreo de orina, que es la frescura de la orina en la orina. vejiga.
6. Leche
Los exosomas y anticuerpos de la leche pueden afectar el desarrollo de los recién nacidos y tienen un gran valor de investigación. La etapa de lactancia, el parto, la dieta, la producción de leche, la lactancia, el estado de salud de la madre y el estado mental afectarán la secreción de exosomas. Cabe señalar que la leche contiene una gran cantidad de lipoproteínas, lo que afectará el aislamiento de los exosomas en una etapa posterior.
7. Líquido cefalorraquídeo
La principal dificultad en el estudio del líquido cefalorraquídeo es la adquisición de muestras. La falta de exosomas en las muestras lo empeora aún más. Entonces, ¿cómo solucionar este problema? Se pueden comprar muestras comerciales normales en el extranjero y también se pueden utilizar como control muestras de otras enfermedades.
En segundo lugar, la conservación de los exosomas
Para la conservación de los exosomas, al igual que otras muestras moleculares, los exosomas extraídos se pueden almacenar a baja temperatura durante un corto periodo de tiempo (dentro de una semana). ) Ponlo a 4 grados y ponlo a -20 o -80 durante mucho tiempo.
Algunas personas piensan que es mejor almacenarlos a 4 grados centígrados, porque temen que la congelación y descongelación a baja temperatura afecte la integridad de los exosomas. Sin embargo, aún no hay ninguna conclusión y la mayor parte de la literatura cree que no habrá ninguna. impacto. Entonces, ¿qué altura debería tener? Hay un truco, subcontratar -20 o -80, según convenga.