¿Cuáles son los principales métodos de aislamiento y purificación de anticuerpos?

Los anticuerpos son proteínas altamente específicas producidas por el sistema inmunológico y se utilizan ampliamente en campos como la medicina, las ciencias biológicas y la biotecnología. La separación y purificación de anticuerpos es el proceso de obtener un único anticuerpo específico a partir de una mezcla compleja. A continuación se presentan varios métodos principales de separación y purificación de anticuerpos:

Purificación de anticuerpos

1. El método utiliza la unión específica entre el anticuerpo y su antígeno correspondiente para purificar el anticuerpo objetivo. El antígeno generalmente se inmoviliza en una fase sólida y luego se agrega una muestra de anticuerpos mixtos. El anticuerpo se une al antígeno y se adhiere a la fase sólida, mientras que otros componentes no específicos se eliminan mediante pasos de lavado. Finalmente, el anticuerpo diana se eluye de la fase sólida en condiciones apropiadas.

2. Cromatografía de intercambio iónico: este método se basa en la diferencia en el estado de carga entre diferentes anticuerpos. Utiliza una matriz iónica para fijar estos anticuerpos y utiliza tampones con concentraciones en gradiente para hacer que los anticuerpos se adsorban/eluyan. según el método de separación y purificación. Específicamente, de acuerdo con las propiedades de carga del anticuerpo, seleccione una matriz de inmovilización iónica apropiada (como DEAE, CM, etc.), pase la muestra de anticuerpo mezclada a través de la matriz ajustando el valor de pH del tampón y luego eluya. el anticuerpo objetivo a través de un gradiente.

Preparación del anticuerpo

3. Método de filtración en gel: este método utiliza diferencias de peso molecular para purificar el anticuerpo objetivo. En la capa de gel, las muestras de anticuerpos se separan aún más en función de sus diferentes pesos moleculares. Por lo general, se selecciona una columna de filtración en gel con parámetros apropiados, como el peso molecular y el tamaño de poro, y el anticuerpo objetivo se puede purificar y purificar de manera eficiente mediante lavado.

4. Método de diálisis: Este método se basa en la diferencia de tamaño de las moléculas de anticuerpo y utiliza una membrana semipermeable para dializar y purificar la muestra mezclada. Se usa una bolsa de diálisis para colocar la muestra mezclada en el interior y luego se usa el tampón para la diálisis. Según el peso molecular del anticuerpo, el anticuerpo se separa después de la diálisis.

Separación de anticuerpos

Existen muchos otros métodos de separación y purificación que también se pueden utilizar para la separación de anticuerpos, como la cromatografía de intercambio hidrófilo, la cromatografía de intercambio hidrófobo y la adsorción por afinidad. Es necesario elegir el método de purificación más adecuado en función de los requisitos específicos del experimento y las características del anticuerpo.