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Derecho empresarial - Traducción al inglés de 350 palabrasLas secuencias codificantes de SBP1 y STM1 se obtuvieron mediante PCR utilizando el genoma de Saccharomyces cerevisiae. El producto de la PCR tiene sitios nítidos de NdeI y XhoI en los extremos de 59 y 39 respectivamente. El fragmento se limitó a pET-15b y se añadió como His6 a Sbp1p y Stm1p. La expresión de la etiqueta dio como resultado los plásmidos pET-SBP1 y pET-STM1. HMT1 está disponible en el laboratorio (Chern et al., 2002). Este se insertó en pBS-MP (Hwang et al. 1999). E.*** El gen de la homometionina aminopeptidasa ((MAP)) ((pBS-MAPp-hmt1) no se modificó. La secuencia promotora del gen STM1 se amplificó a partir de PBS-MAPP-HMT1 y el codón de parada se cambió a 11. El plásmido pGEX-STM1 con el nucleótido 39 se insertó en los genes NotI y HMT1 en ese momento, utilizando los sitios 59 y 39 con NdeI y BamHI respectivamente. Según el conocimiento, el producto de la PCR se ligó al final de 59 con STM1 como inicio. codón y se convirtió en el vector pET-15b para generar la secuencia del vector de pET-STM 1-((MAPP-HMT 1)) que codifica la etiqueta His6 pET-15b ubicada entre los sitios NcoI y NdeI. -Proteína de fusión terminal His6 controlada por el promotor T7 Finalmente, en PET-STM1-(MAPP-HMT 1) WAS, se usó SBP1 en su lugar, Sbp1p/hmt1 genera STM 1 ((PET-SBP1-[MAPP HMT 65438]). Los residuos de arginina están presentes en el sitio de escisión de trombina de todos los plásmidos de expresión como se describió anteriormente (PET-SBP 1, PET-STM 65438 sitio de escisión de trombina Punto y genera mutagénesis dirigida a la posición de STM 1 R236k, R237k, R240K y R243K mutantes con rápida cambios en posición. Se formaron elementos mutados (Stratagene) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. e. * * * Se usaron células Tongli bl 21((DE3) como huéspedes para la expresión de proteínas. Las células transformadas con el plásmido se cultivaron en caldo de Lauia a 30ºC. ° C hasta que el cultivo alcanzó una absorbancia de luz de 0,6 a 600 nm. Luego se añadió isopropil B-D-1- (IPTG, concentración final 1 mM), las células se incubaron durante 4 h antes de la recolección. Se purificó por afinidad utilizando perlas quelantes de Ni2 (Novagen) según las instrucciones del fabricante.
Traducción al inglés de 350 palabrasLas secuencias codificantes de SBP1 y STM1 se obtuvieron mediante PCR utilizando el genoma de Saccharomyces cerevisiae. El producto de la PCR tiene sitios nítidos de NdeI y XhoI en los extremos de 59 y 39 respectivamente. El fragmento se limitó a pET-15b y se añadió como His6 a Sbp1p y Stm1p. La expresión de la etiqueta dio como resultado los plásmidos pET-SBP1 y pET-STM1. HMT1 está disponible en el laboratorio (Chern et al., 2002). Este se insertó en pBS-MP (Hwang et al. 1999). E.*** El gen de la homometionina aminopeptidasa ((MAP)) ((pBS-MAPp-hmt1) no se modificó. La secuencia promotora del gen STM1 se amplificó a partir de PBS-MAPP-HMT1 y el codón de parada se cambió a 11. El plásmido pGEX-STM1 con el nucleótido 39 se insertó en los genes NotI y HMT1 en ese momento, utilizando los sitios 59 y 39 con NdeI y BamHI respectivamente. Según el conocimiento, el producto de la PCR se ligó al final de 59 con STM1 como inicio. codón y se convirtió en el vector pET-15b para generar la secuencia del vector de pET-STM 1-((MAPP-HMT 1)) que codifica la etiqueta His6 pET-15b ubicada entre los sitios NcoI y NdeI. -Proteína de fusión terminal His6 controlada por el promotor T7 Finalmente, en PET-STM1-(MAPP-HMT 1) WAS, se usó SBP1 en su lugar, Sbp1p/hmt1 genera STM 1 ((PET-SBP1-[MAPP HMT 65438]). Los residuos de arginina están presentes en el sitio de escisión de trombina de todos los plásmidos de expresión como se describió anteriormente (PET-SBP 1, PET-STM 65438 sitio de escisión de trombina Punto y genera mutagénesis dirigida a la posición de STM 1 R236k, R237k, R240K y R243K mutantes con rápida cambios en posición. Se formaron elementos mutados (Stratagene) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. e. * * * Se usaron células Tongli bl 21((DE3) como huéspedes para la expresión de proteínas. Las células transformadas con el plásmido se cultivaron en caldo de Lauia a 30ºC. ° C hasta que el cultivo alcanzó una absorbancia de luz de 0,6 a 600 nm. Luego se añadió isopropil B-D-1- (IPTG, concentración final 1 mM), las células se incubaron durante 4 h antes de la recolección. Se purificó por afinidad utilizando perlas quelantes de Ni2 (Novagen) según las instrucciones del fabricante.