Cómo mejorar la eficiencia de Crispr
La mayoría de los estudios sobre edición del genoma de plantas utilizan el sistema CRISPR-Cas9 (SpCas9) de Streptococcus pyogenes. El reconocimiento de spCas9 se basa en la secuencia PAM NGG específica, lo que limita en gran medida la selección de sitios de edición en el sistema. Para resolver este problema, los investigadores han partido de diferentes direcciones para encontrar soluciones.
2065438+En marzo de 2006, investigadores del grupo de investigación de Wang Kejian en el Instituto de Investigación del Arroz de China obtuvieron variantes de la proteína Cas9 mediante mutagénesis dirigida y editaron con éxito secuencias adyacentes en el genoma del arroz, expandiendo enormemente el gen. Rango de selección de sitios de edición (Hu et al., 2016). Sin embargo, en comparación con el sistema CRISPR-Cas9-VQR original, la eficiencia de edición del sistema CRISPR-Cas9 sigue siendo baja, lo que limita la promoción y aplicación de este sistema en el arroz.
El 12 de junio de 2017, el equipo de Wang Kejian colaboró con el equipo de Li Jiayang del Instituto de Genética y Biología del Desarrollo de la Academia de Ciencias de China y publicó un artículo titulado “¿Mejorando la eficiencia? Rice CRISPR-Cas9-VQR Precision Genome Editing" (Hu et al., 2018) mejoró significativamente la eficiencia de edición del genoma CRISPR-Cas9 y CRISPR-cas 9 del sistema. A través de experimentos, la mayor eficiencia de edición en arroz puede alcanzar casi 80%, y la mejora máxima puede alcanzar 8 veces. Al mismo tiempo, el sistema puede conectar múltiples sgRNA en serie a través de una conexión de isoenzimas y editar múltiples sgRNA al mismo tiempo (para conocer el método de construcción, consulte el artículo publicado). (por el equipo del Dr. Wang Chun y Wang Kejian en el Journal of Genetics and Genomics en 2015; Wang et al., 2015). En la edición multisitio, la mejora de la eficiencia es más obvia y puede alcanzar 15 veces la modificación. El sistema CRISPR-Cas9-VQR se convertirá en una poderosa herramienta para editar múltiples sitios de destino NGA.