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• ¿Cuáles son los requisitos para la purificación de ácidos nucleicos? Para muchas aplicaciones de biología molecular y genómica, desde la clonación y la PCR hasta la secuenciación del genoma y el análisis de microarrays, la purificación del ADN es el único método. Sin embargo, elegir el mejor kit de depuración no es fácil. Por ejemplo, cuando se purifica ADN genómico, se necesita un kit que pueda manejar ácidos nucleicos suavemente sin aislar el ADN plasmídico. Además, la tecnología de secuenciación de próxima generación impone requisitos muy elevados a las muestras y también necesitamos algunos productos especiales para purificar el ADN. Aquí presentamos algunas opciones nuevas. ¿Método de precipitación de sal epicentro maestro puro (subsidiaria de Illumina)? CompleteDNAPurificationKit utiliza un método patentado de precipitación de sal. Esta serie de kits cubre una variedad de tipos de muestras, que incluyen sangre, tejido fijo, plantas, levaduras, insectos, etc. , puede generar altos rendimientos de ácidos nucleicos con poca pérdida en solo 30 minutos. Según Cristine Kinross, gerente senior de productos de Epicenter, al utilizar estos kits, los usuarios no necesitan realizar una purificación adicional antes de preparar muestras para secuenciación u otras aplicaciones de biología molecular. Eliminan proteínas y otros desechos celulares sin introducir compuestos tóxicos que deban eliminarse, evitando así lavados repetidos y aumentando el rendimiento de ácidos nucleicos. "La pureza de los ácidos nucleicos recuperados por MasterPure es extremadamente alta, lo que permite que las muestras vayan directamente a la preparación de la biblioteca de secuenciación", dijo Kinross. Por supuesto, también es adecuado para otras aplicaciones, incluidas microarrays, qPCR y clonación. Además, este kit también se puede utilizar para la purificación de ARN. Después de obtener el ácido nucleico total, se puede obtener ARN total mediante tratamiento con ADNasa. Varios kits Promega ofrece una variedad de kits de purificación de ácidos nucleicos que utilizan varias estrategias diferentes. ¿Como un mago? El kit de purificación de ADN genómico se basa en el método de precipitación clásico y puede extraer de manera flexible y eficiente ADN genómico de sangre completa, células de cultivo de tejidos, tejidos animales y vegetales, levaduras y bacterias. ¿Qué pasa con ReliaPrep? Esta serie de kits utiliza un método de extracción en columna, que es sencillo y rápido. Además, Promega también ofrece kits de purificación basados ​​en perlas magnéticas. Eric Vincent, gerente global de productos de Promega Genomics, dijo: "Aunque la composición exacta de la solución variará, el proceso básico de lisis, unión, lavado y elución es aplicable a diferentes métodos de unión (como gel de sílice o celulosa), diferentes formatos de purificación (columna de purificación o perlas magnéticas), así como operaciones de purificación manuales y automatizadas "Para algunos tipos de muestras muy importantes (como las muestras FFPE), se requieren algunas operaciones o manipulación especiales. "Desarrollamos tampones de unión/lavado únicos que eliminan eficazmente sustancias que inhiben las reacciones posteriores, mientras que los sistemas optimizados permiten a los investigadores capturar pequeñas cantidades de ácidos nucleicos y eluirlos en pequeños volúmenes (menos de 30 μl). También desarrollamos soluciones automatizadas para un variedad de reactivos y rendimientos”, dijo Vincent. Estos kits proporcionan una solución completa para la elución de ácidos nucleicos en volúmenes muy pequeños y al mismo tiempo evitan residuos de inhibidor en el eluato. Después de la purificación con estos kits, los ácidos nucleicos se pueden utilizar para análisis posteriores, como PCR, secuenciación de Sanger, secuenciación de próxima generación y microarrays. El clásico kit de purificación de ácidos nucleicos con membrana de sílice de QIAGEN se basa en la combinación de ADN y membrana de sílice en la columna de purificación. Los inhibidores se eliminan por lavado y posteriormente el ADN intacto se eluye de la columna con alto rendimiento y pureza, lo que da como resultado bibliotecas de secuenciación de próxima generación de mayor calidad. Marco Lidori, gerente global de productos para la preparación de muestras en QIAGEN, cree que el alto rendimiento se vuelve particularmente importante cuando se trata de muestras extremadamente pequeñas o muestras difíciles como FFPE. Puede producirse una desaminación aleatoria de citosina en el ADN generado a partir de muestras de FFPE, lo que puede dar lugar a polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) artificiales. Sin embargo, GeneReadDNAFFPEKit de QIAGEN puede eliminar las citosinas desaminadas, lo que evita resultados erróneos en experimentos de NGS. Este producto aún no se ha lanzado oficialmente. Si está interesado en probarlo, complete la información. "La mayoría de nuestros kits han sido validados en aplicaciones NGS, que van desde la secuenciación del genoma completo del ADN tumoral circulante hasta el microbioma", dijo Polidori. Estos kits permiten a los usuarios obtener ADN de alta calidad a partir de una variedad de muestras, evitar la ilusión CT de las muestras FFPE y obtener ADN de alto peso molecular en poco tiempo. MagAttractHMWDNAkit puede purificar ADN de 100 a 200 kb mediante una simple operación con perlas magnéticas. Todo el proceso de purificación elimina suavemente contaminantes e inhibidores con un rendimiento y una pureza extremadamente altos. ¿GenElute de la empresa de sal caotrópica Sigma-Aldrich? El kit de purificación genómica de mamíferos es un producto a base de reactivos de sales caotrópicas. Las muestras se lisan en soluciones que contienen sales caotrópicas para garantizar la desnaturalización completa de las macromoléculas. Agregue etanol para unir el ADN a la membrana de sílice. Los contaminantes se eliminan por lavado y el ADN se eluye en tampón Tris. Con membranas de sílice seleccionadas específicamente para el aislamiento de ADN genómico, el kit permite a los usuarios purificar ADN de alta calidad a partir de una variedad de muestras, incluidas células cultivadas, tejidos (incluida la cola de rata), sangre entera fresca o leucocitos. Según los informes, este kit combina las ventajas de la unión de membranas de sílice y la microcentrifugación, evitando resinas costosas, precipitación de etanol y sustancias orgánicas nocivas como el fenol y el cloroformo.
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En la práctica, es necesario revisar los estatutos de la empresa, los certificados de aporte de capital, los certificados de capital, las acciones, la lista y registro de accionistas, el acuerdo de transferencia de capital de la empresa, el acuerdo de suscripción de capital autorizado o capital nuevo después de la constitución de la empresa, y las disputas. entre inversores anónimos e inversores de renombre. , estos pueden utilizarse como prueba para demostrar las calificaciones de los accionistas. En diferentes relaciones jurídicas y situaciones fácticas, diversas formas de prueba pueden ejercer distintos grados de poder probatorio. Consulte a un abogado profesional sobre cómo ver y conservar pruebas. Y: 1. Una sociedad anónima es una sociedad anónima registrada (en lo sucesivo, la sociedad objetivo) con un capital registrado de. La Parte A es el accionista registrado oficialmente de la empresa objetivo y posee el % de las acciones de la empresa objetivo. 2. Sujeto a las condiciones y procedimientos de transferencia de capital estipulados en la ley y los estatutos de la empresa objetivo, la Parte A está dispuesta a realizar la transferencia; su capital a la Parte B de conformidad con las disposiciones de este Acuerdo % de acciones (acciones conjuntas) en la empresa objetivo (en adelante, "acciones objetivo"). 3. La Parte B está dispuesta a aceptar las acciones objetivo transferidas por la Parte A de conformidad con este acuerdo. De conformidad con las disposiciones de los "Principios generales del derecho civil", la "Ley de sociedades de la República Popular China" y otras leyes, reglamentos y documentos normativos pertinentes, las partes del acuerdo han llegado al siguiente acuerdo sobre lo anterior: mencionó la transferencia de acciones sobre la base de la igualdad, el beneficio mutuo y el consenso mediante consulta: Artículo 1 El precio de transferencia y el método de pago de las acciones objetivo son 1, y la contribución de capital correspondiente de las acciones objetivo en poder de la Parte A se ha pagado en su totalidad. La Parte A ahora acepta transferir las acciones objetivo en poder de la Parte A a la Parte B a un precio de 10.000 RMB. (Si el capital registrado suscrito para las acciones transferidas no se ha pagado en su totalidad, se puede acordar que la Parte B pagará el aporte de capital a tiempo de acuerdo con los estatutos de la empresa e indicar que la Parte B acepta comprar las acciones objetivo a este precio y condiciones 2. Ambas partes acuerdan que después de la firma de este acuerdo, la Parte B realizará los pasos de registro: Pagará el precio de transferencia de capital a la Parte A en cuotas: (1) Dentro de los 5 días a partir de la fecha de la firma de este acuerdo, La Parte B paga el % del precio de transferencia de acciones, que es RMB; (2) Dentro de los días posteriores a la entrada en vigor de este acuerdo, la Parte B paga el % del precio de transferencia de acciones, es decir, RMB (3) la Parte B pagará el % del resto; precio de transferencia de acciones, es decir, RMB, dentro de los días posteriores a la fecha en que la empresa objetivo complete el registro de cambio de accionistas (también se pueden acordar otras condiciones de pago según las circunstancias específicas y las condiciones de la transacción). El proceso de transferencia de capital y los asuntos complicados, muchas empresas no completan los procedimientos de registro de cambio industrial y comercial de manera oportuna, y los riesgos ocultos también son enormes. Los abogados recuerdan que cuando se completa la transferencia de capital, se realizan los correspondientes procedimientos de registro de cambio industrial y comercial. debe completarse de manera oportuna para evitar problemas. En la práctica, hay muchas situaciones en las que una de las partes se arrepiente y el momento de ocurrencia varía mucho, por lo que la oferta estipula las obligaciones de ambas partes en todos los aspectos. información de la cuenta receptora designada: Nombre de la cuenta: Banco de apertura: Cuenta: Artículo 464 Declaraciones, Garantías y Compromisos El cesionario del acuerdo de transferencia de capital puede querer obtener el control de la empresa objetivo, pero en última instancia quiere obtener beneficios económicos ejerciendo el capital y el pasivos de la empresa (deuda bancaria, deuda bancaria, etc.), garantías externas, multas administrativas y litigios. En base a esto, el cesionario debe exigir al cedente del acuerdo de transferencia de capital que haga declaraciones y garantías relativamente específicas y detalladas sobre la autenticidad de la información sobre la empresa objetivo y la verdadera situación de los activos de la empresa en el acuerdo de transferencia de capital. El propósito de esto es prevenir riesgos y mejorar las soluciones de incumplimiento de contrato. Por lo tanto, cuando el cedente de un acuerdo de transferencia de capital oculta deliberadamente información relevante sobre la empresa objetivo y causa pérdidas al cesionario, el cesionario tiene derecho a exigir al cedente que asuma la correspondiente responsabilidad de indemnización de conformidad con las disposiciones pertinentes del Código Civil. sobre responsabilidad por incumplimiento de contrato. ¡Así que ambas partes deben prestar atención! 1. Las Partes A y B garantizan que son sujetos civiles aptos de conformidad con las leyes chinas (por ejemplo, la empresa debe estar registrada legalmente y existir válidamente), tener las calificaciones para firmar este acuerdo y cumplir con las obligaciones estipuladas en este acuerdo. y ejecutará este acuerdo de buena fe. 2. Todas las garantías y compromisos asumidos por ambas partes en este acuerdo son continuos e irrevocables, y no se verán afectados por disputas, procedimientos legales e instrucciones de unidades superiores, ni se verán afectados por cambios en los nombres y accionistas de ambas partes. y otros cambios Sin embargo, la ley Se hacen excepciones expresamente y necesarias para hacer cumplir las decisiones judiciales. Los sucesores, agentes, destinatarios y otros herederos de los derechos y obligaciones de las partes de este Acuerdo tienen obligaciones y responsabilidades continuas por las respectivas garantías y compromisos asumidos por las partes de este Acuerdo y las obligaciones que deben cumplir según las disposiciones de este Acuerdo. . 3. La Parte A por la presente hace las siguientes declaraciones, garantías y compromisos a la Parte B: (1) La Parte A garantiza que las acciones transferidas están legalmente en posesión de la Parte A, que la Parte A tiene derechos completos y legales para disponer de ellas, y que hay no existen circunstancias que puedan afectar la transferencia de capital. No habrá incautación judicial ni congelación de ninguna prenda u otra garantía, y la Parte B no será acusada, perseguida ni perjudicada sustancialmente de otro modo por otras partes debido a la transferencia de acciones. Al mismo tiempo, la Parte A garantiza que la información financiera relevante sobre la empresa objetivo y las acciones objetivo que proporciona a la Parte B durante el proceso de transacción es verdadera y completa. En caso contrario, la Parte A asumirá incondicionalmente todas las responsabilidades económicas y legales que de ello se deriven.
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