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• Cómo construir un vector1 La selección y transformación de promotores son a menudo razones importantes por las que no se pueden obtener plantas transgénicas ideales. Debido a que los promotores desempeñan un papel clave en la determinación de la expresión genética, la primera consideración es seleccionar un promotor vegetal apropiado y aumentar su actividad. Actualmente, los promotores ampliamente utilizados en los vectores de expresión de plantas son promotores constitutivos. Por ejemplo, la mayoría de las plantas transgénicas dicotiledóneas utilizan el promotor C a M V 3 5 S, mientras que las plantas transgénicas monocotiledóneas utilizan principalmente el promotor U biquit in del maíz y el promotor Actin l del arroz. Bajo el control de estos promotores expresados ​​constitutivamente, los genes extraños se expresarán en todas las partes de la planta transgénica y en todas las etapas de desarrollo. Sin embargo, la expresión continua de alta eficiencia de genes extraños en plantas receptoras no solo causa desperdicio, sino que a menudo también causa cambios morfológicos en las plantas y afecta su crecimiento y desarrollo. Para que los genes extraños desempeñen un papel eficaz en las plantas y reduzcan los efectos adversos en las plantas, la gente está prestando cada vez más atención a la investigación y aplicación de promotores de expresión específicos. Los promotores específicos descubiertos incluyen principalmente promotores específicos de órganos y promotores específicos de inducción. Por ejemplo, promotores específicos de semillas, promotores específicos de frutas, promotores específicos de células del mesófilo, promotores específicos de raíces, promotores inducidos por lesiones, promotores inducidos químicamente, promotores inducidos por luz, promotores inducidos por choque térmico, etc. La clonación y aplicación de estos promotores específicos sienta las bases para la expresión específica de genes extraños en plantas. Por ejemplo, la empresa suiza CBA-Geigey utiliza el promotor PR-IA para controlar la expresión de genes de la toxina Bt en tabaco transgénico. Dado que el promotor puede ser inducido por ácido salicílico y sus derivados, obviamente es un método muy eficaz para inducir la expresión de genes resistentes a insectos mediante la pulverización de productos químicos baratos y no contaminantes durante la temporada en la que reaparecen las plagas. En la investigación de plantas transgénicas, no se pueden obtener resultados satisfactorios utilizando promotores naturales. Especialmente cuando se realiza expresión específica y expresión inducida, los niveles de expresión son en su mayoría insatisfactorios. Transformar los promotores existentes y construir promotores compuestos será un enfoque muy importante. Por ejemplo, Ni et al. combinaron la región de activación de la transcripción del promotor del gen de la octopina sintasa con el promotor del gen de la manolina sintasa. Los resultados de la expresión de GUS mostraron que la actividad del promotor modificado era significativamente mayor que la del promotor 3 5 S. Wu Rui y otros combinaron el promotor inducible del gen PI-III con el intrón 1 del gen Actinl del arroz, y la actividad de expresión del nuevo promotor aumentó casi 10 veces (patente). Estos promotores artificiales desempeñan un papel importante en la investigación en ingeniería genética vegetal. 2. Mejorar la eficiencia de la traducción. Para mejorar la eficiencia de la traducción de genes extraños, los genes generalmente se modifican cuando se construyen vectores. Se consideran tres aspectos principales: 2.1 Agregar secuencias 5′-3′ no traducidas. Muchos experimentos han descubierto que la secuencia no traducida (UTR) 5′-3′ de genes eucariotas es muy necesaria para la expresión normal de genes. La eliminación de este segmento a menudo conduce a la estabilidad y el nivel de traducción del ARNm, como en el mosaico del tabaco. Hay un elemento ω que consta de nucleótidos de 68 pb aguas arriba del sitio de inicio de la traducción del gen de la proteína de 126 kDa del virus (TMV). Proporciona un nuevo sitio de unión para el ribosoma, que puede unirse a la actividad de traducción de nosotros. .Los genes aumentan decenas de veces. Actualmente, muchos vectores añaden secuencias potenciadoras de la traducción ω al extremo 5' de genes exógenos. Ingelbrecht et al. estudiaron las secuencias del extremo 3' de varios genes y descubrieron que la secuencia del extremo 3' del gen de la octopina sintasa puede aumentar la expresión transitoria del gen NPTI III en más de 20 veces. Además, las secuencias del extremo 3' de diferentes genes tienen diferentes eficiencias para promover la expresión génica. Por ejemplo, la secuencia terminal 3' de los glóbulos rojos promueve la expresión génica 60 veces más que el gen de la chalcona sintasa. 2.2 Optimizar la secuencia alrededor del codón de inicio Aunque el codón de inicio es universal en biología, los genes de diferentes fuentes biológicas tienen sus propias secuencias especiales alrededor del codón de inicio. Por ejemplo, las características típicas de la secuencia alrededor del codón de inicio de la planta es A A C C A U G C, y la secuencia alrededor del codón de inicio del animal es C A C C A U G, que es muy diferente de la de los procariotas. K o z a k estudió en detalle el efecto de la mutación dirigida al sitio de las bases alrededor del codón de inicio A T G sobre la transcripción y la traducción, y concluyó que en eucariotas, cuando la secuencia alrededor del codón de inicio es C C A T G G, la eficiencia de transcripción y traducción es la más alta, especialmente Las posiciones at-3 son muy importantes para la eficiencia de la traducción. Esta secuencia se conoció más tarde como secuencia k0z a K y se utilizó en la construcción de vectores de expresión. Por ejemplo, existe un gen de quitinasa bacteriana cuya secuencia de código inicial original es U U U A U G G. Cuando se modificó a A C C A U G G, su nivel de expresión en el tabaco se multiplicó por ocho. Por lo tanto, cuando se construye un vector de expresión utilizando genes no vegetales, se debe modificar de acuerdo con las características de la secuencia que rodea el codón de inicio de la planta. 2.3 Modificación de regiones codificantes de genes Si los genes extraños provienen de procariotas, los niveles de expresión de estos genes en las plantas suelen ser muy bajos debido a diferencias en los mecanismos de expresión.
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La ciudad no sólo tiene una larga historia, sino que también es rica en recursos. Es una típica ciudad basada en recursos. La superficie terrestre es de 945 kilómetros cuadrados, el área de almacenamiento de carbón representa el 82,8% del área total y las reservas probadas son de 9 mil millones de toneladas. También hay decenas de minerales con reservas comprobadas como el aluminio, el hierro y la piedra caliza. Desde la fundación de la Nueva China hasta finales de 2008, la ciudad de Xiaoyi había producido más de 2.6543,8 mil millones de toneladas de carbón bruto, 654,38+ mil millones de toneladas de carbón limpio y 500 millones de toneladas de coque. En marzo de 2009, la ciudad de Xiaoyi figuraba como el segundo grupo de ciudades con recursos agotados del país y la única ciudad con recursos agotados en la provincia de Shanxi. Los esfuerzos de la ciudad de Xiaoyi por avanzar han generado un hermoso halo tras otro: en los diez años transcurridos entre 1998 y 2008, la ciudad de Xiaoyi completó el salto de tres etapas de "liderar a Luliang, primera clase en tres Jins y uno de los 100 mejores". en el país". En 2006, el PIB superó los 10 mil millones de yuanes y los ingresos fiscales totales superaron los 2 mil millones de yuanes, ubicándose en el puesto 96 entre los 100 principales condados del país, logrando el gran objetivo de ser "los 100 principales de China". En 2007, ocupaba el puesto 88 entre los 100 principales condados del país. En 2008, el PIB regional superó los 200.100 millones de yuanes y los ingresos fiscales totales superaron los 4.354 millones de yuanes, ocupando el primer lugar en la provincia. Sin embargo, detrás de su hermosa aura se esconde la contaminación ambiental y la sobreexplotación de los recursos: en los años posteriores a 2004, el Comité del Partido Provincial de Shanxi y el Gobierno Provincial elogiaron a los "Diez Mejores Condados" de la provincia, pero la ciudad de Xiaoyi, que ocupaba el primer lugar en indicadores económicos , fue criticado por sus indicadores de protección ambiental "un voto de veto" y no estaba en la lista, en 2006, la Oficina Provincial de Protección Ambiental implementó "restricciones de aprobación regional" en dos condados y ciudades de nuestra provincia, y en la ciudad de Xiaoyi; El crecimiento económico más rápido de la provincia, es uno de ellos. Rumores sociales: "Durante muchos años, debido a la contaminación ambiental, Xiaoyi no ha verificado a ningún recluta calificado. Ante esta vergüenza, el secretario del Comité Municipal del Partido de Xiaoyi está pensando, el alcalde está pensando y los tomadores de decisiones de Xiaoyi". están pensando... Aunque la "aprobación limitada" es despiadada, envía una señal de que la sociedad requiere la transformación económica de Xiaoyi. Aunque los rumores son falsos, reflejan el descontento de la gente con su entorno de vida. De hecho, la ciudad de Xiaoyi lleva mucho tiempo planeando cambiar su modelo de desarrollo económico. En 2002, el Comité Municipal del Partido y el Gobierno Municipal de Xiaoyi invitaron a expertos del Centro de Investigación Económica y Desarrollo de Tierras de la Comisión Nacional de Desarrollo y Reforma para realizar investigaciones sobre la transformación de la ciudad de Xiaoyi en una ciudad basada en recursos. En 2003, la transformación económica de las ciudades basadas en recursos se propuso claramente en la reunión de trabajo del Comité Municipal del Partido de Xiaoyi, pero no esperaba que todo sucediera tan rápido. La situación es urgente y no podemos prescindir de ella. Es mejor girar tarde que temprano, y girar lentamente que rápido. El conocimiento se convirtió en conocimiento, y Xiao Yi se situó en una nueva línea de partida. Del 5 de junio de 2006 a octubre de 2006, el Noveno Congreso Provincial del Partido, de gran importancia para el desarrollo futuro de Shanxi, trazó una hoja de ruta para el desarrollo científico de Shanxi desde las perspectivas de la historia, la realidad y el futuro: adherirse a los principios científicos. desarrollo Guiados por el concepto, saldremos de los "cuatro caminos" y lograremos los "tres saltos", construiremos una nueva base energética e industrial nacional y construiremos un nuevo Shanxi que esté lleno de vitalidad, prosperidad, civilización, armonía, estabilidad y paz, y hermosas montañas y ríos. En el proyecto de "Nueva Shanxi", la ciudad de Xiaoyi se posiciona de la siguiente manera: objetivo: construir un enfoque de ciudad central regional: lograr la transformación económica de una ciudad basada en recursos. Este es el contenido central que el alcalde Zhang Xuguang ha elaborado muchas veces. , y también es el contenido central discutido por los participantes en la Conferencia de Trabajo Económico de la ciudad de Xiaoyi de 2008. La transformación y el desarrollo se han convertido en una opción inevitable para la ciudad de Xiaoyi, y es hora de promover la transformación económica de las ciudades basadas en recursos. Después de años de sobreexplotación, Xiaoyi ha entrado ahora en un período de disminución de los recursos minerales. Además, desde la segunda mitad de 2008, afectada por la crisis financiera internacional y la implementación de la estrategia de fusión, reorganización e integración de las empresas mineras de carbón de Shanxi, el desarrollo económico y social de la ciudad de Xiaoyi ha experimentado cambios profundos. En particular, 50 aldeas se han quedado sin recursos, las minas de carbón han cerrado y la tierra se ha derrumbado. No hay empleos ni tierra para plantar. Según las estadísticas de la encuesta de 2005 de la ciudad, dentro de 945 kilómetros cuadrados de Xiaoyi, el hundimiento de la tierra causado por la minería del carbón alcanzó 169 kilómetros cuadrados, y 10 pueblos, 295 aldeas, 53.100 hogares y alrededor de 200.000 casas sufrieron daños en diversos grados. A lo largo de los años se han acumulado cientos de millones de toneladas de ganga de carbón. Los gases residuales de las minas de carbón, las aguas residuales y los residuos no solo contaminan el medio ambiente, sino que también ocupan una gran cantidad de tierra. "La transformación y el desarrollo de la ciudad de Xiaoyi son urgentes. Hasta cierto punto, la transformación y el desarrollo de la ciudad de Xiaoyi son 'forzados'", dijo Yang Yuxi, director de la Oficina de Protección Ambiental de la ciudad de Xiaoyi. Esta "fuerza" ha llevado a una gran emancipación de la mente, una visión estratégica para aprovechar las oportunidades, un mecanismo de desarrollo reformado e innovador, e importantes ideas y proyectos para la transformación y el desarrollo urbano, incluida la transformación industrial, el medio ambiente ecológico, la construcción social y producción de seguridad del carbón. La inversión total es de 465.438+2 mil millones de yuanes. El camino salió y fue "forzado". Los patrones del carbón apuntan a la agricultura moderna. Aunque muchos jefes del carbón en Xiaoyi han "perdido colectivamente la voz" y se han retirado a la segunda línea, todavía van y vienen en el escenario de los 100 condados principales, con productos agrícolas y secundarios a la cabeza y desempeñando el papel principal para el primer tiempo. Liderados por el Parque de Demostración de Ciencia y Tecnología Agrícola de Levin y una serie de proyectos agrícolas modernos a gran escala, promoveremos vigorosamente el desarrollo de la industrialización agrícola y crearemos una base agrícola moderna de primera clase en la provincia. El gran artículo de Xiao Yi sobre el cambio de "negro" a "verde" es igualmente llamativo.
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